[发明专利]一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法

说明书

本发明公开了一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，所述对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法步骤如下：步骤一：肠癌标本的制备，步骤二：肠癌单细胞悬液试验前准备；步骤三：分组准备；步骤四：培养基数据的测定，将步骤三中的空白组、对照组和药物试验组均置于37℃、5％CO_2，培养箱48h后，继续培养4h，弃培养液，每孔加DMSO 150uL；充分溶解10min，并通过全自动酶标仪各项数据，本发明一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，能够简便、快捷、经济的对肠癌细胞特异性进行判别，并且能够可快速的筛选出对患者使用特异性强的药物，能够减轻患者多次化疗对身体的巨大痛苦，而且能够增加单次的化疗治疗效果。

技术领域

本发明涉及一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，属于肠癌类器官药物测定技术领域。

背景技术

化疗是临床治疗恶性肿瘤的重要手段之一，大肠癌中、晚期患者术后需辅助化疗。大肠癌普遍存在化疗耐药问题，经验化疗因用药缺乏客观依据给患者带来许多痛苦。为了提高用药的针对性和敏感性，在化疗前进行体外抗肿瘤药敏性测定显得尤为重要。利用癌细胞原代培养进行药敏试验可针对性地指导治疗由于大肠癌对化疗药物敏感性存在的个体差异。

因此如何能在患者化疗针对患者的病情选择出正确有效的药物，实现个体差异性治疗是具有重大的意义，因此亟需一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，所述对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法步骤如下：

步骤一：肠癌标本的制备，无菌取新鲜大肠癌手术标本，在含抗生素培养基中浸泡15min-25min，然后通过粉碎机将标本剪成0.5-1.0mm³的碎块，置50ml离心管中，加入混合消化酶的培养基中，获取肠癌单细胞悬液；

步骤二：肠癌单细胞悬液试验前准备，台盼蓝对步骤一中的肠癌单细胞悬液染色，激活肿瘤细胞数，大肠癌细胞培养于含20％胎牛血清的1640培养基中，于2个96孔板中；

步骤三：分组准备，在步骤二中的96孔板中，每孔接种200u L,37℃.5％CO，饱和湿度的培乔箱中培养24h后，于96孔板中加入药物，测定细胞生长，96孔板分为空白组、对照组和药物实验组；

步骤四：培养基数据的测定，将步骤三中的空白组、对照组和药物试验组均置于37℃、5％CO_2，培养箱48h后，继续培养4h，弃培养液，每孔加DMSO150uL；充分溶解10min，并通过全自动酶标仪各项数据。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤一中，肠癌单细胞悬液在37摄氏度消化1h，然后需要经过200目筛网过滤。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤二中，大肠癌细胞还需以0.25％胰酶消化后制成1x10/mL细胞悬液，均匀的置于2个96孔板中。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤三的药物实验组中，分为单药组、两药联合化疗组和三药联合化疗组。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤三中，单组药加入各组浓度药物100uL；2种药物联合用药时采用1:1方案，使药物浓缩1倍后各加50uL，使每孔的药物浓度、体积和总量不变；3种药物联合应用时，采用1:1:1万方案；便约初浓缩2倍后各加25u L，再补加25uL培养基以便药物浓度及总量不变。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤四中，测定的数据包括测定各孔光密度值(OD值)，空白组OD＜0.005，实验组OD＞0.1为有效实验。