[发明专利]一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法

权利要求书

1.一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，其特征在于，所述对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法步骤如下：

步骤一：肠癌标本的制备，无菌取新鲜大肠癌手术标本，在含抗生素培养基中浸泡15min-25min，然后通过粉碎机将标本剪成0.5-1.0mm³的碎块，置50ml离心管中，加入混合消化酶的培养基中，获取肠癌单细胞悬液；

步骤二：肠癌单细胞悬液试验前准备，台盼蓝对步骤一中的肠癌单细胞悬液染色，激活肿瘤细胞数，大肠癌细胞培养于含20％胎牛血清的1640培养基中，于2个96孔板中；

步骤三：分组准备，在步骤二中的96孔板中，每孔接种200u L,37℃.5％CO，饱和湿度的培乔箱中培养24h后，于96孔板中加入药物，测定细胞生长，96孔板分为空白组、对照组和药物实验组；

步骤四：培养基数据的测定，将步骤三中的空白组、对照组和药物试验组均置于37℃、5％CO_2，培养箱48h后，继续培养4h，弃培养液，每孔加DMSO150uL；充分溶解10min，并通过全自动酶标仪各项数据。

2.根据权利要求1所述的一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，其特征在于：所述步骤一中，肠癌单细胞悬液在37摄氏度消化1h，然后需要经过200目筛网过滤。

3.根据权利要求1所述的一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，其特征在于：所述步骤二中，大肠癌细胞还需以0.25％胰酶消化后制成1x10/mL细胞悬液，均匀的置于2个96孔板中。

4.根据权利要求1所述的一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，其特征在于：所述步骤三的药物实验组中，分为单药组、两药联合化疗组和三药联合化疗组。

5.根据权利要求1所述的一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，其特征在于：所述步骤三中，单组药加入各组浓度药物100uL；2种药物联合用药时采用1:1方案，使药物浓缩1倍后各加50u L，使每孔的药物浓度、体积和总量不变；3种药物联合应用时，采用1:1:1万方案；便约初浓缩2倍后各加25u L，再补加25uL培养基以便药物浓度及总量不变。

6.根据权利要求1所述的一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法，其特征在于：所述步骤四中，测定的数据包括测定各孔光密度值(OD值)，空白组OD＜0.005，实验组OD＞0.1为有效实验。