[发明专利]一种用于检测猪血凝性脑脊髓炎病毒的引物、探针及试剂盒

说明书

本发明提供一种用于检测猪血凝性脑脊髓炎病毒的引物、探针及试剂盒。本发明的引物包括上游引物和下游引物，所述的上游引物的序列为5’‑TTGGCGGGATGGCAGTTGTT‑3’；所述的下游引物的序列为5’‑ACAGGGTACGAGACGGGCAT‑3’；所述的探针的序列为5’‑ACGGGTTCGGGGTACGAGTGT‑3’。采用本发明的引物、探针进行猪血凝性脑脊髓炎病毒荧光定量PCR检测，具有简单快速，灵敏度高，重复性、准确性好，特异性强，回收率高等优点。

技术领域

本发明具体涉及一种用于检测猪血凝性脑脊髓炎病毒的引物、探针及试剂盒。

背景技术

生物制品主要是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成的用于人类疾病的预防、治疗或诊断的产品。相较于小分子药物而言，生物制品生产过程中使用的各种材料来源复杂，可能引入外源因子或毒性化学材料，加之制剂成分复杂且一般不能进行终端灭菌，质量控制仅靠成品检定难以保证其安全性和有效性。因此，对生物制品生产用原材料和辅料进行严格的安全质量控制，是降低外源因子或有毒杂质污染风险、保证生物制品安全有效的必要措施。为了检测病毒是否存在，需要使用一些检测方法对生物制品进行检测。

猪血凝性脑脊髓炎病毒作为生物制品病毒安全性评价的一个重要指标，高效检测猪血凝性脑脊髓炎病毒成为安全性评价中的重要环节。常规的生物制品安全评价方法中，多使用传统检测方法，例如细胞实验、动物抗体产生实验，存在操作复杂、耗时长、误差大以及成本高等问题，严重限制生物制品的生产推广。荧光定量PCR技术能够缩短实验周期，减少污染物，并且具有高灵敏度以及高特异性等优势从而渐渐推广开来，但是针对具体病毒，荧光定量PCR的实时准确的检测效果是建立在所选取的引物和探针的基础上的，因此，用于检测猪血凝性脑脊髓炎病毒的引物和探针成为研究的重点。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够快速、准确地检测猪血凝性脑脊髓炎病毒的引物、探针及试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种用于检测猪血凝性脑脊髓炎病毒的引物、探针，所述的引物包括上游引物和下游引物，所述的上游引物的序列为5’-TTGGCGGGATGGCAGTTGTT-3’；所述的下游引物的序列为5’-ACAGGGTACGAGACGGGCAT-3’；所述的探针的序列为5’-ACGGGTTCGGGGTACGAGTGT-3’。

优选地，所述的探针的5’端连接有荧光报告基团，所述的探针的3’连接有荧光淬灭基团。

进一步优选地，所述的荧光报告基团为FAM；所述的荧光淬灭基团为TAMRA或BHQ。

本发明还提供一种用于检测猪血凝性脑脊髓炎病毒的试剂盒，所述的试剂盒包括上述引物、探针。

优选地，所述的试剂盒还包括DNA标准品，所述的DNA标准品的序列为TTGGCGGGATGGCAGTTGTTCATGTGTTAGCACTGACACTACTGTTCAATCAAAAGATACTAATTTTTTAAACGGGTTCGGGGTACGAGTGTAGATGCCCGTCTCGTACCCTGT。

优选地，所述的试剂盒还包括购自上海碧云天生物技术有限公司的qPCR预混液BeyoFast^TM Probe qPCR Mix(2×)。

本发明还提供所述的引物、探针或所述的试剂盒在检测生物制品中猪血凝性脑脊髓炎病毒中的应用。

本发明还提供一种检测生物制品中猪血凝性脑脊髓炎病毒的检测方法，以待检测生物制品中的DNA为模板，采用所述的引物、探针进行荧光定量PCR反应，采集荧光信号以确定所述的待检测生物制品中的猪血凝性脑脊髓炎病毒的含量。