[发明专利]一种重组地衣芽孢杆菌全细胞转化产(R)-柠苹酸的方法

权利要求书

1.一种可转化生产(R)-柠苹酸的重组地衣芽孢杆菌，其特征在于，以地衣芽孢杆菌为宿主，引入异源柠苹酸合酶搭建了(R)-柠苹酸合成途径；所述柠苹酸合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的重组地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述柠苹酸合酶的编码基因如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的重组地衣芽孢杆菌，其特征在于，以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CICIM B1391为宿主，以质粒pHY-PLK300为表达载体。

4.含有权利要求1～3任一所述地衣芽孢杆菌的细胞催化剂。

5.制备权利要求4所述细胞催化剂的方法，其特征在于，将权利要求1～4任一所述的重组地衣芽孢杆菌在培养基中培养一段时间，收集菌体作为全细胞催化剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养基以蔗糖为碳源，以棉籽蛋白为氮源；所述培养是在37℃培养至少48h。

7.权利要求1～3任一所述的重组地衣芽孢杆菌在全细胞转化产(R)-柠苹酸中的应用。

8.一种全细胞转化生产(R)-柠苹酸的方法，其特征在于，以权利要求1～4任一所述的重组地衣芽孢杆菌为细胞催化剂，或应用权利要求5所述的细胞催化剂，以葡萄糖为底物反应至少24h。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，全细胞转化体系中，所述重组地衣芽孢杆菌的OD₆₀₀为70～80，葡萄糖浓度为50～150g/L，初始pH为4～9.5。

10.权利要求1～3任一所述的重组菌，或权利要求4所述的细胞催化剂，或权利要求8～9任一所述的方法在生产含(R)-柠苹酸的产品中的应用。