[发明专利]一种通过自然化学连接法合成普卡那肽的方法

权利要求书

1.一种通过自然化学连接法合成普卡那肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)合成硫酯片段I、片段II或者合成硫酯片段III、片段IV；

所述硫酯片段I为H-Asn-Asp-Glu-Cys⁴-Glu-Leu-Cys(Acm)⁷-Val-Asn-Val-Ala-SR；

所述片段II为Cys¹²-Thr-Gly-Cys(Acm)¹⁵-Leu-OH；

所述合成硫酯片段III为H-Asn-Asp-Glu-Cys(Acm)⁴-Glu-Leu-SR；

所述片段IV为Cys⁷-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)¹²-Thr-Gly-Cys¹⁵-Leu-OH；

其中，所述SR为硫醇的残基；

(2)硫酯片段I与片段II或者硫酯片段III与片段IV在水相中进行自然片段连接反应，得到普卡那肽线性粗肽M1或者M2；

所述普卡那肽线性粗肽M1为：

H-Asn-Asp-Glu-Cys⁴-Glu-Leu-Cys(Acm)⁷-Val-Asn-Val-Ala-Cys¹²-Thr-Gly-Cys(Acm)¹⁵-Leu-OH；

所述普卡那肽线性粗肽M2为：

H-Asn-Asp-Glu-Cys(Acm)⁴-Glu-Leu-Cys⁷-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)¹²-Thr-Gly-Cys¹⁵-Leu-OH；

(3)普卡那肽线性粗肽M1或者M2的半胱氨酸氨基酸残基经两步氧化环化，得到普卡那肽粗肽，经过分离纯化获得普卡那肽纯品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫醇为烷基硫醇或芳基硫醇；

优选地，所述烷基硫醇选自巯基乙酸甲酯，3-巯基丙酸乙酯，3-巯基丙酸甲酯和三氟乙硫醇中的一种；

优选地，所述芳基硫醇选自对巯基苯乙酸、对巯基苯酚和苯硫醇中的一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自然化学连接反应的水相体系为Gu·HCl或Urea，芳基硫醇或烷基硫醇或Imidazole或Triazole，TCEP·HCl和Na₂HPO₄的混合液，所述混合液的pH值在6～8之间；

所述自然化学连接反应的反应温度为室温。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Gu·HCl或Urea的浓度为6～8M，所述芳基硫醇或烷基硫醇的浓度为50mM～200mM，所述Imidazole或Triazole的浓度为2.0M～5.0M，所述TCEP·HCl的浓度为50mM～100mM，所述Na₂HPO₄的浓度为0～200mM。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酯片段I与片段II的物质的量比为1.0～2.0：1

所述硫酯片段III与片段IV的物质的量比为1.0～2.0：1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氧化环化采用的氧化剂选自空气、O₂、H₂O₂、GSSH、GSH、DMSO和碘中的一种或多种；

优选地，所述氧化剂为空气、DMSO、碘或H₂O₂。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酯片段I、硫酯片段III通过固相合成、液相合成或固液相结合的合成方法合成得到；

所述片段II、片段IV通过固相合成或液相合成方法合成得到。