[发明专利]荧光定量PCR法鉴别单纯疱疹病毒I型和/或II型的试剂及其应用

权利要求书

1.一种检测单纯疱疹病毒的试剂，该试剂包括：

针对单纯疱疹病毒I型US1基因的荧光定量PCR扩增引物；和/或

针对单纯疱疹病毒II型UL26基因的荧光定量PCR扩增引物。

2.根据权利要求1所述的试剂，其中：

针对单纯疱疹病毒I型US1基因的荧光定量PCR扩增引物包括：

上游引物HSV1-US1F：5′-TCTGGGGACCAGGATGAAG-3′

下游引物HSV1-US1R：5′-GACGCATCCGTTTCCGT-3′；

针对单纯疱疹病毒II型UL26基因的荧光定量PCR扩增引物包括：

上游引物HSV2-UL26F：5′-GTTGTTGTTTCTGGTCCGCC-3′

下游引物HSV2-UL26R：5′-GATGCCCCCGAACCAACTTA-3′。

3.根据权利要求1所述的试剂，该试剂还包括：

针对单纯疱疹病毒I型US1基因的荧光定量PCR检测探针；和/或

针对单纯疱疹病毒II型UL26基因的荧光定量PCR检测探针。

4.根据权利要求3所述的试剂，其中：

针对单纯疱疹病毒I型US1基因的荧光定量PCR检测探针包括：

探针HSV1-US1P：5′-TCCGCCGACATGTCCAGAAA-3′；

针对单纯疱疹病毒II型UL26基因的荧光定量PCR检测探针包括：

探针HSV2-UL26P：5′-GGACGTCGGCGGACACACAACA-3′。

5.根据权利要求1所述的试剂，该试剂还包括：

US1基因的阳性质控品；和/或

UL26基因的阳性质控品。

6.根据权利要求5所述的试剂，其中：

US1基因的阳性质控品具有SEQ ID NO:7所示核苷酸序列：

SEQ ID NO:7：GGATTCGACCGAGTCTGGGGACCAGGATGAAGCCCCCCGCATCGGTGGCCGTAGGGCCCCCCGGAGGCTTGGGGGGCGGTTTTTTCTGGACATGTCGGCGGAATCCACCACGGGGACGGAAACGGATGCGTCGGTGTCGGAC；

UL26基因的阳性质控品具有SEQ ID NO:8所示核苷酸序列：

SEQ ID NO:8：AGGGAAGGGTGGGGGTGGTGGTGGTGGGGTGTTTTTCTGTTGTTGTTGTTTCTGGTCCGCCTGGTCACAAAAGGCACGGCGCCCCGAAACGCGGGCTTTAGTCCCGGCCCGGACGTCGGCGGACACACAACAACGGCGGGCCCCGTGGGTGGGTAAGTTGGTTCGGGGGCATCGCTGTATTCCCTTGCCCGCTTCCACCCCCCCTTCCCGTTTGGTTTGTTTGTGCGGGTGCCCATGGCGTC。

7.一种检测单纯疱疹病毒的试剂盒，该试剂盒包括：权利要求1-6任一项所述的试剂；

优选地，所述试剂盒还包括：2×PCR预混液、DNase/RNase-Free去离子水中的一种或多种。

8.一种非诊断目的的检测单纯疱疹病毒的方法，该方法包括：

利用权利要求1-6任一项所述的试剂，对待测样品进行荧光定量PCR检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述荧光定量PCR为两重荧光定量PCR，该方法用于鉴别待测样品中是否含有单纯疱疹病毒I型和/或单纯疱疹病毒II型；

优选地，PCR反应体系为20μL，包含10μL qPCR预混液和4μL的模板，各引物终浓度为0.2～0.4μM，各探针的终浓度为0.1～0.2μM，余量为无菌无酶水；

更优选地，PCR反应程序为：50℃，2min，94℃预变性10min，94℃变性15s，58～60℃退火50～60s，40～45个循环。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，核酸样本扩增曲线呈S型且Ct值38，判断为阳性；

优选地，所述方法进一步包括根据标准曲线计算病毒载量。