[发明专利]荧光定量PCR法鉴别单纯疱疹病毒I型和/或II型的试剂及其应用

说明书

本发明提供了一种荧光定量PCR法鉴别单纯疱疹病毒I型和/或II型的试剂及其应用。本发明首先提供一种检测单纯疱疹病毒的试剂，该试剂包括：针对单纯疱疹病毒I型US1基因的荧光定量PCR扩增引物；和/或针对单纯疱疹病毒II型UL26基因的荧光定量PCR扩增引物。本发明的试剂用于两重荧光定量PCR检测单纯疱疹病毒，可有效区分HSV‑1、HSV‑2，具有良好的特异性、敏感性和重复性，并且检测便捷，具有良好的兼容性。为临床鉴别诊断提供了很好技术支撑，具有良好的社会应用前景和价值。

技术领域

本发明是关于一种检测单纯疱疹病毒的试剂及其应用，具体地说，本发明是关于一种荧光定量PCR法鉴别单纯疱疹病毒I型和/或II型的试剂、试剂盒及相关检测方法。

背景技术

单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)是人类病毒性疾病中常见的病原体之一，根据抗原性不同，可分为单纯疱疹病毒I型(HSV-1)和单纯疱疹病毒II型(HSV-2)两种血清型。两种血清型的临床表现不同，HSV-1主要引起如眼、口、唇、生殖器部位的皮肤黏膜以及中枢神经系统的感染，HSV-2主要引起生殖器部位的皮肤黏膜及新生儿感染，并与女性外阴癌和宫颈癌的发生有关。HSV两种亚型感染的预后和处理方法不同，因此对HSV感染进行早期诊断和分型具有重要的临床意义和流行病学意义。

目前对HSV的检测方法主要有直接涂片法、病毒分离培养法和血清学检测法。

直接涂片法主要是从皮损处取材或者取疱疹皮肤囊泡内分泌物涂片，进行Wright染色或Giemsa染色(Tzanck涂片)，显微镜下可见到含有核内包涵体和融合的多核鳞状上皮细胞。直接涂片法是临床检验科室常见的病原体检测方法之一，该方法可快速检测，且结果直观可靠，检测费用相对较低，能够节省患者候诊时间和检测费用。然而，该方法阳性检出率较低，检测结果容易受到主观和客观因素的影响，常会出现假性结果，对检测者的技术及经验要求较高。另外，该方法的不能准确分辨水痘感染、带状疱疹感染和单纯疱疹病毒感染，因为这三种病毒感染后均为疱疹病变，并且如果疱疹病变为溃疡，涂片敏感性将显著降低。

病毒分离培养法是将病毒或者含有病毒的体液、分泌物等样本接种于组织或者细胞中进行培养，使活病毒得到扩增，引起细胞病变(常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解或者脱落)来判断或者分离病毒的方法。然而，病毒培养法的特异性较差，因为受单纯疱疹病毒感染引起的细胞病变，难于区分其他病毒。此外，该方法对实验条件要求高、耗时长、成本高、操作繁琐、易污染，一般只用作科研或流行病学调查，而在临床常规应用有很大的局限性，不易开展。而且检测结果受转运时是否冷冻处理影响很大。

血清学检测法是指临床上常用免疫学方法对血清中的抗原和抗体检测的方法。病毒抗原可以通过直接荧光法(DIF)、酶免疫分析法(EIA)或者酶联免疫吸附实验(Elisa)在样品中检测到。抗原检测对临床表现典型者适用。然而，目前尚未有符合国际标准的病毒特异性抗原检测试剂盒，因而数据尚有争议。抗体检测可在无明显临床表现情况下判断是否感染，主要从血清中检测抗体，可以提示持续潜伏感染，也可用于病毒分型。临床常用的Elisa法检测血清中针对HSV的IgM/IgG。然而，抗体的产生需要一定的窗口期，IgM抗体在感染10天后才出现，并且只在HSV感染初期后才能被检测到,并且在病毒潜伏期和复发感染时检测常为阴性，不能反应感染的真实情况，同时也可能与其他疱疹病毒尤其是与水痘-带状疱疹病毒产生交叉作用。此外，影响Elisa检测的因素较多，如恒温箱的温度，采集的样本和人为操作等都可能会对结果产生影响，从而导致假阳性的出现。

发明内容

本发明的一个目的在于针对现有技术中单纯疱疹病毒检测方法灵敏度和准确度不够理想的缺点，提供一种鉴别单纯疱疹病毒I型和/或II型的新技术。

为实现上述目的，本发明主要是基于当前分子诊断中广泛使用的探针法荧光定量检测法，建立了针对单纯疱疹病毒的检测方法。

具体而言，一方面，本发明提供了一种检测单纯疱疹病毒的试剂，该试剂包括：