[发明专利]一种用于检测血液中肿瘤突变基因的方法

说明书

本发明涉及肿瘤检测技术领域，尤其为一种用于检测血液中肿瘤突变基因的方法，包括以下步骤：S1，将蛋白质消化酶至投入离心管中，再依次将细胞裂解液和血液样品送入离心管中，把离心管送入离心机中，在3000rpm下高速涡旋震荡20‑30s，结束后将离心管水浴孵育处理20min，水浴孵育结束后，向离心管中加无水乙醇并送入离心机内，在3000rpm下高速涡旋震荡40‑50s，再将离心机转速提高到10000g并离心5秒，接着将离心管内的混合液转移到硅胶膜柱子中，并把硅胶膜柱子放入新的离心管内，对装有硅胶膜柱子的新离心管进行离心处理，本发明可以有效解决目前现有的方法在满足临床快速检测基因突变的需要时有一定的局限性，操作方法较为不便的问题。

技术领域

本发明涉及肿瘤检测技术领域，具体为一种用于检测血液中肿瘤突变基因的方法。

背景技术

基因突变的检测在临床疾病诊断中起着十分重要的作用。目前，筛查基因点突变常常采用以PCR为基础的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳与各种基因突变检测技术相结合的方法。

目前现有的方法在满足临床快速检测基因突变的需要时有一定的局限性，操作方法较为不便。

因此，需要一种用于检测血液中肿瘤突变基因的方法来解决上述背景技术中提出的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测血液中肿瘤突变基因的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于检测血液中肿瘤突变基因的方法，包括以下步骤：

S1，将蛋白质消化酶至投入离心管中，再依次将细胞裂解液和血液样品送入离心管中，把离心管送入离心机中，在3000rpm下高速涡旋震荡20-30s，结束后将离心管水浴孵育处理20min，水浴孵育结束后，向离心管中加无水乙醇并送入离心机内，在3000rpm下高速涡旋震荡40-50s，再将离心机转速提高到10000g并离心5秒，接着将离心管内的混合液转移到硅胶膜柱子中，并把硅胶膜柱子放入新的离心管内，对装有硅胶膜柱子的新离心管进行离心处理，将离心处理后的硅胶膜离心柱取出并置于无核酸酶的离心管中，对其进行分离处理，得到DNA提取液，并将DNA提取液放置在-20℃保存；

S2，将DAN提取液送入试管内，然后加入缓冲液和海藻糖，搅拌混合均匀后，在-5℃静置10-20min，然后加入含有海藻糖的扩增反应试剂和DNA聚合酶，在43-45℃下保温反应20-30min，再加热至55℃终止反应，得到DNA扩增产物；

S3，以dTTP、dGTP、dATP以及第三标记物作为底物，将DNA扩增产物组加入到固定有亲和素受体的酶标板中，使DNA扩增产物通过第三标记物与亲和素受体的作用固定到酶标板上，使用第一荧光标记物标记目标基因引物组的上游引物，用第二荧光标记物标记目标基因引物组的下游引物，用酶标仪检测DNA扩增产物中是否存在第一荧光标记物和第二荧光标记物。

作为本发明优选的方案，所述S1中水浴孵育处理的具体操作步骤为：将混合液离心管放入水浴锅中，在65℃下水浴孵育10min，取出离心管并送入离心机中，在3000rpm下涡旋震荡5秒，再放回水浴锅继续孵育10min，取出离心管并送入离心机内，在10000g下离心2秒。

作为本发明优选的方案，所述S1中离心处理的具体操作步骤为：将装有硅胶膜柱子的离心管放入离心机中并在10000g下离心1min，离心结束后，将硅胶膜柱子从离心管中取出并放入新的离心管中，用洗涤液冲洗后，送入离心机内在10000g下离心1分钟后取出并弃液，再加入漂洗液，并再次送入离心机内在10000g下离心1分钟后取出并弃液，重复上述操作2-3次。