[发明专利]一种胶原蛋白肽粉及其制备方法

权利要求书

1.一种胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：

P1用水将新鲜猪黄喉表面的血块等杂质冲洗干净，冲洗完毕后用无菌厨房纸轻压擦干猪黄喉表面水分；

P2将步骤P1所得猪黄喉切成小块，再和提取剂混合后投入破壁机中打浆得到黄喉浆；

P3将步骤P2所得黄喉浆离心，然后在低温下静置一段时间，将上层乳状液体和底层固形不溶物分离，取所述上层乳状液体，即蛋白原浆；

P4用盐酸和磷酸氢二钠调节所述蛋白原浆的pH，然后加入胃蛋白酶，搅拌，酶解，得到中间产物A；

P5用氢氧化钠水溶液和磷酸二氢钠调节所述中间产物A的pH，然后加入胰蛋白酶，搅拌，酶解，得到中间产物B；

P6将步骤P5所得中间产物B通过高温灭酶失活，离心，然后用滤布过滤并取滤液，得到中间产物C；

P7将所述中间产物C和水混合，然后在低温条件下离心，取上清液并将其加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱中，依次用水、浓度分别为0.3mol/L和0.5mol/L的NaCl溶液洗脱，收集中间产物D；

P8将所述中间产物D和水混合，然后在低温条件下离心，取上清液并将其加入到葡聚糖凝胶柱层析中，用水洗脱，收集洗脱组分，得到中间产物E；

P9将所述中间产物E和水混合，然后利用高效液相色谱法进行纯化，得到中间产物F；

P10将步骤P9所得中间产物F冷冻干燥，粉碎后过筛，得到所述延缓细胞老化的胶原蛋白肽粉；

P11将步骤P10制备的延缓细胞老化的胶原蛋白肽粉加入水解蚕丝水溶液中混合均匀，均质搅拌，获得乳液；在上述乳液中加入壳聚糖季铵盐水溶液，并用氢氧化钠水溶液调节pH，然后搅拌，得到混合液，向混合液中加入谷氨酰胺转胺酶，加热反应，反应结束后进行过滤，取滤渣、洗涤、冷冻干燥，得到胶原蛋白肽粉。

2.如权利要求1所述胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：步骤P11中所述延缓细胞老化的胶原蛋白肽粉与水解蚕丝的质量比为1：(1-6)；所述水解蚕丝与谷氨酰胺转胺酶的质量比为1：(0.1-0.5)。

3.如权利要求1所述胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：步骤P6中采用温度为110-115℃、时长为8-10min的工艺条件将步骤P5所得中间产物B灭酶失活。

4.如权利要求1所述胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：步骤P7中将所述中间产物C和水混合并配置成浓度为45-50mg/mL的溶液，然后在4-5℃以8000-9000rpm的转速离心10-12min，取上清液并将其加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱中，依次用水、浓度分别为0.3mol/L和0.5mol/L的NaCl溶液洗脱，每次洗脱时间均为90-100min，收集中间产物D。

5.如权利要求1所述胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：步骤P8中将所述中间产物D和水混合并配置成浓度为25-30mg/mL的溶液，然后在4-5℃以8000-9000rpm的转速离心10-12min，取上清液并将其加入到葡聚糖凝胶柱层析中，用水洗脱，以检测器灵敏度为0.2A、进样量为2.0-2.2mL、流速为0.3-0.4mL/min、检测器调至280nm处检测的工艺条件收集洗脱组分，得到中间产物E。

6.如权利要求1所述胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：步骤P9中将所述中间产物E和水混合并配置成浓度为80-85μg/mL的溶液，然后以柱温为33-35℃、流动相为浓度为10-12wt.％的乙腈水溶液、进样量为3-4μL、色谱柱为Agilent C18、洗脱速度为1-1.2mL/min的工作条件利用高效液相色谱法进行纯化，得到中间产物F。

7.如权利要求1所述胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：所述提取剂的溶剂是无水乙醇、乙酸丁酯、水的混合物，溶质是聚乙烯亚胺、聚乙二醇、肝素、肌醇、稳定剂的混合物。

8.如权利要求7所述胶原蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：所述稳定剂为三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐、L-二硫苏糖醇中的至少一种。