[发明专利]眼底新生血管性疾病检测生物标记物、检测试剂盒及应用

权利要求书

1.一种眼底新生血管性疾病检测的生物标记物，其特征在于，所述眼底新生血管性疾病检测的生物标记物为tRNA衍生片段tRF-1001，所述眼底新生血管性疾病检测的生物标记物的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。

2.一种应用如权利要求1所述的眼底新生血管性疾病检测的生物标记物的眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒包括PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括SYBR Premix Ex Taq 2×100μL，tRF-1001特异性的qRT-PCR上游引物，tRF-1001特异性的qRT-PCR下游引物，GAPDH定量PCR上游引物，GAPDH定量PCR下游引物，引物各1管，10μM，100μL/管。

3.如权利要求2所述的眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述SYBR Premix Ex Taq 2×包括Ex Taq酶，dNTP Mixture，Mg²⁺，Tli RNaseH，TBGreen。

4.如权利要求2所述的眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述GAPDH定量PCR上游引物核苷酸序列为SEQ ID NO：2，下游引物核苷酸序列为SEQ IDNO：3；所述tRF-1001特异性的qRT-PCR上游引物核苷酸序列为SEQ ID NO：4，下游引物核苷酸序列为SEQ ID NO：5；RNA反转录随机引物为GAPDH定量PCR引物序列。

5.如权利要求2所述的眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒还包括反转录反应体系，所述反转录反应体系包括总RNA反转录引物，1管，50μM，50μL/管；反转录酶，200U/μL，50μL；dNTPMixture，10mM each 50μL；反转录buffer50μL。

6.如权利要求5所述的眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述总RNA反转录引物包括Oligo dT和Random 6mers。

7.如权利要求2所述的眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述眼底新生血管性疾病实时荧光定量PCR检测试剂盒还包括RNA抽提体系，所述RNA抽提体系包括Trizol reagent，1管，2000μL/管；氯仿，1管，500μL/管；无水乙醇，1管，8000μL/管；DEPC ddH₂O，1管，1000μL/管；ddH₂O，1管，2000μL/管；异丙醇，8000μL/管。

8.一种实施如权利要求1所述的眼底新生血管性疾病检测的生物标记物的眼底新生血管性疾病检测的生物标记物的筛选方法，其特征在于，所述眼底新生血管性疾病检测的生物标记物的筛选方法包括以下步骤：

步骤一，样本准备：收集湿性年龄相关性黄斑变性患者的房水标本和老年性白内障患者房水标本，RNA采用TRIzol试剂提取，并保存于-80℃备用；

步骤二，以湿性年龄相关性黄斑变性患者房水标本为实验组，老年性白内障患者房水标本为对照组，采用反转录试剂盒进行total RNA的逆转录；

步骤三，采用定量PCR验证芯片分析的实验结果，验证靶点tRF-1001在湿性年龄相关性黄斑变性患者以及白内障患者房水中的表达差异。

9.一种如权利要求1所述的眼底新生血管性疾病检测的生物标记物在制备眼底新生血管性疾病诊断试剂中的应用。

10.一种如权利要求1所述的眼底新生血管性疾病检测的生物标记物在制备眼底新生血管性疾病治疗后的预后评估试剂中的应用。