[发明专利]一种具有类分子伴侣功能的固定化载体及应用

权利要求书

1.一种具有类分子伴侣功能的固定化载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体步骤为：

(1)将N-叔丁基丙烯酰胺或N-苯基丙烯酰胺溶在乙醇中，将N-异丙基丙烯酰胺、功能单体、交联剂和引发剂溶在水中，以上反应物以不同比例混合，加入检测池中，超声通氮气5-10min脱除混合液中的氧气后，在检测池底原位聚合反应得到聚合物薄层；反应后用水清洗聚合物薄层3-5次，除去未反应的单体；

(2)向检测池中加入酶溶液进行孵育，酶被固载到检测池底部的聚合物薄层上，除去上清液，测定固定在聚合物薄层上的酶的催化活力，筛选出对酶分子亲和力高和活力提升大的聚合物合成配方；

(3)以步骤(2)筛选出来的配方配制原料，再加入模板剂和表面活性剂，超声通氮气5-10min脱除混合液中的氧气后，搅拌聚合反应得到聚合物纳米颗粒，洗脱模板剂并透析纯化，获得具有类分子伴侣功能的固定化载体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的功能单体选自丙烯酸、衣康酸、甲基丙烯酸、N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、(3-丙烯酰胺丙基)三甲基氯化铵、1-乙烯基咪唑、N-[(3-(二甲氨基)丙基]甲基丙烯酰胺、4-乙烯基苯硼酸、丙烯酰胺、甲基丙烯酸羟乙酯、N-(2-氨基乙基)丙烯酰胺、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱中的一种或几种；所述的交联剂为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺、N,N'-乙烯基双丙烯酰胺和乙二醇二甲基丙烯酸酯中的一种或几种；所述的引发剂为过硫酸铵、偶氮二异丁腈或四甲基乙二胺。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)的聚合反应在密封或氮气氛围下进行，聚合反应温度为25℃-80℃，聚合反应时间为2-72h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)测定固定在聚合物薄层上的酶的催化活力的方法为：向检测池中加入显色剂，反应2min后，使用酶标仪测定吸光度值，计算出聚合物对酶活的影响。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的表面活性剂为十二烷基硫酸钠或十六烷基三甲基溴化铵，所述的表面活性剂的用量为0.01-0.2mg/mL。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的模板剂为酶分子、酶分子的表位多肽、酶分子或酶分子表位多肽表面修饰的二氧化硅微球、四氧化三铁磁球或玻璃珠微球。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的聚合反应在密封或氮气氛围下进行，聚合反应温度为25℃-65℃，聚合反应时间为2-72h。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)的聚合反应完成后，通过升高温度到50-90℃、降低温度到0-10℃、或者加入浓度为0.5M-5M的NaCl水溶液搅拌反应2-24h洗脱模板剂。

9.一种酶固定的方法，其特征在于，所述方法的具体操作为：将具有类分子伴侣功能的固定化载体分散在水中，然后加入游离酶，在0-10℃下孵育1-48h，之后透析纯化，获得固相酶制剂。

10.一种失活酶复性的方法，其特征在于，所述方法的具体操作为：将0.5-100mg/mL具有类分子伴侣功能的固定化载体与失活酶先35-40℃孵育0.5-2h，再3-5℃孵育20-30h。