[发明专利]小麦株高主效基因的多重KASP标记引物组及应用

权利要求书

1. 一组小麦株高主效基因的多重KASP标记引物组，其特征在于，所述引物组由核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的引物F、核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的引物H、核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的通用引物R组成。

2.如权利要求1所述多重KASP标记引物组在同时检测小麦Rht-B1和Rht-D1基因中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用是指以所述多重KASP标记引物组对小麦样品进行PCR扩增后，再对扩增产物进行荧光检测；如果荧光检测结果为蓝色，则说明样品小麦的基因型为Rht-B1b/ Rht-D1a； 如果荧光检测结果为红色，则说明样品小麦的基因型为Rht-B1a/ Rht-D1b；如果荧光检测结果为绿色，则说明样品小麦的基因型为Rht-B1b/Rht-D1b；如果荧光检测结果为D黑色，则说明样品小麦的基因型为Rht-B1a/Rht-D1a或空白。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增是指：

PCR反应体系：KASP Assay Mix 0.07 μL，浓度为20 ng/μL的小麦模板DNA 2.43 μL，2×KASP Master Mix 补足至5 μL；

其中，每100μL所述KASP Assay Mix包括：浓度为100 μM的所述引物F 12 μL ，浓度为100 μM的所述引物H 12 μL ，浓度为100 μM的所述通用引物R 30μL,以 ddH₂O补足至100μL；

PCR反应程序：94℃ 15 min；94℃ 20 s，61-55℃ 1 min，每个循环降低0.6℃，共10个循环；94℃ 20 s，55℃ 1 min，共26个循环。