[发明专利]用于动物组织的裂解液及其在CUT＆Tag中的使用方法

说明书

本发明公开了用于动物组织的裂解液及其在CUTTag中的使用方法。本发明涉及生物技术和表观遗传学技术领域，具体提供了一种适用于动物组织的裂解液及其在CUTTag中的应用方法，该裂解液中含有的适量温和性非离子去垢剂NP40(或CA630)及Triton X‑100，在保障细胞核完整的同时，可高效裂解组织团块，促进细胞核快速释放，从而获得适用于组织CUTTag文库构建的细胞核，使得在动物组织层面执行CUTTag技术成为可能，在表观技术研究领域具有较大的应用优势和较高的商业价值。

技术领域

本发明属于生物技术和表观遗传学技术领域，具体为用于动物组织的裂解液及其在CUTTag中的使用方法。

背景技术

DNA与蛋白质的相互作用，在生命体DNA复制与重组、RNA转录、翻译和修饰过程，以及基因的表达调控中发挥着重要作用，其相互作用几乎涉及生物体的所有生命活动。随着2007年，染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP-seq)首次提出，该技术迅速成为研究人员探究DNA-蛋白质互作的金标准。但ChIP-seq技术对样品和数据的需要量大，信噪比和分辨率低。且存在甲醛交联后，引起抗原表位改变等缺陷，从而易造成假阳性结果的出现，制约了其在表观基因组学领域的进一步发展。CUTRUN(Cleavageunder target and release using nuclease)技术作为一项表观遗传学领域重大革新性技术，大大减少了实验所需的细胞量，能在低测序深度的情况下，得到高信噪比的数据，因此在很大程度上可作为ChIP-seq的代替技术，从而得到了广泛的应用与发展。但CUTRUN存在成本高、耗时长、工作量大的弊端。2019年，研究人员克服了ChIP-seq和CUTRUN技术的局限性，在CUTRUN基础上，有效的结合了ATAC-seq技术，从而提出了CUTTag技术。染色质靶向切割和标签化(CutTag,Cleavage under target and tagment)是利用Protein A/Protein G与经过改造的Tn5转座子形成融合蛋白，通过Protein A/Protein G与特异性抗体性相互作用，将Protein A/G-Tn5锚定在特异性抗体区域实现高效快速的切割DNA，在靶向切割的同时，利用转座酶催化双链进行重组交换的特性，在DNA两端加上外源的扩增接头序列对DNA进行标记，从而实现快速、高效、高分辨率的微量DAN建库测序。相较于ChIP-seq和CUTRUN技术而言，CUTTag技术具有实验周期短，操作简便，信噪比高，重复性好，细胞投入量低等优点，未来甚至可以实现单细胞层面的检测。

然而，尽管CUTTag技术在哺乳动物细胞系上的应用较为成熟，但考虑到组织样本较为稀少，或者组织保存状态略差的情况下，从动物组织中提取大量完好细胞核仍比较困难，所以该技术在动物组织样本中的使用方法并不是十分广泛。鉴于此，本发明提出一种适用于动物组织提取细胞核的裂解液配方及其在动物组织CUTTag中的使用方法，该发明对于探究动物组织样品中DNA与蛋白质互作信息，对于表观遗传学研究，具有重要意义和实用价值。

发明内容

针对上述情况，为弥补上述现有缺陷，本发明提供了用于动物组织的裂解液及其在CUTTag中的使用方法，该裂解液可以有效的解决现有的技术问题，该方法适用性广，样品需要量少，实验耗时短，操作简便，同时也能适用于保存状态略差的样品。

本发明提供如下的技术方案：本发明提出了一种用于动物组织的裂解液，具体由下列重量份数的组分组成：

所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)的pH为7.5，所述乙二胺四乙酸的pH为8.0。

本发明提出了一种用于动物组织的裂解液在CUTTag中的使用方法，具体包括下列步骤：

(1)称取动物组织样，DPBS重悬清洗组织样；