[发明专利]用于动物组织的裂解液及其在CUT＆Tag中的使用方法

权利要求书

1.用于动物组织的裂解液，其特征在于，具体由下列重量份数的组分组成：

所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸的pH为7.5，所述乙二胺四乙酸的pH为8.0。

2.根据权利要求1所述的用于动物组织的裂解液在CUTTag中的使用方法，其特征在于，具体包括下列步骤：

(1)称取动物组织样，DPBS重悬清洗组织样；

(2)采用对应重量份数的乙基苯基聚乙二醇或辛基苯基-聚乙烯二醇、曲拉通X-100、甘油溶液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠、乙二胺四乙酸、蛋白酶抑制剂和去离子水配置的裂解液在4℃条件下，裂解动物组织样，初提细胞核，获得细胞核悬液，显微镜观察细胞核状态；

(3)采用浓度为37％的低浓度甲醛固定细胞核中DNA-蛋白质之间的互作信息：

采用37％的低浓度甲醛在室温条件下固定细胞核2分钟，2.5M甘氨酸在室温条件下，终止交联5分钟，显微镜计数，取20-30万个细胞核；

(4)制备完整细胞核：采用下面两种方法中的其中一个即可

①细胞核与经处理的ConA beads共同孵育15分钟，通过包被刀豆蛋白的Con A beads与细胞核核膜的多糖结合，形成Con A beads与细胞核复合物，镜检ConA beads与细胞核的结合效果；或②不使用Con A beads，通过低速离心的方式，沉淀细胞核；

(5)细胞核与特异性抗体在室温条件下共同孵育2小时，或4℃孵育过夜进行一抗处理；

(6)结合了一抗的细胞核与相应的特异性抗体进行二抗处理，再次在室温条件下共同孵育1小时；

(7)结合了特异性抗体的细胞核，与PA/G-Tn5转座酶共同孵育；在抗体的精准引导下，转座酶靶向切割与特异性抗体互作的基因组DNA序列，并将接头序列插入到DNA片段两端；

(8)加入SDS、EDTA失活PA/G-Tn5转座酶；加入Proteinase K，消化提取片段化的DNA；

(9)通过PCR扩增，实现微量DNA测序文库构建；

(10)测序文库片段筛选，文库浓度与片段分布检测；

(11)高通量测序，得到DNA与特定蛋白的互作信息。

3.根据权利要求2所述的用于动物组织的裂解液在CUTTag中的使用方法，其特征在于，步骤(2)所述低浓度甲醛固定细胞核中DNA-蛋白质之间的互作信息的方法为：细胞核镜检合格后，使用初始浓度为37％，终浓度为0.1％-0.2％的单分子甲醛，固定细胞核。