[发明专利]一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法，其特征在于，将核糖-1-激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶以及聚磷酸激酶的编码基因通过重组载体导入受体菌进行诱导表达，进而得到用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌；

其中，所述核糖-1-激酶来源为智人、酿酒酵母或克雷伯氏菌中的一种；所述嘌呤核苷磷酸化酶来源为家鼠；所述烟酰胺核糖激酶来源为智人；所述聚磷酸激酶来源为斯氏马里杆菌、异常嗜糖气单胞菌或耐辐射球菌中的一种；所述受体菌为突变型大肠杆菌或野生型大肠杆菌。

2.如权利要求1所述的一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法，其特征在于，来源为克雷伯氏菌的所述核糖-1-激酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示；来源为智人的所述核糖-1-激酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.2；来源为酿酒酵母的所述核糖-1-激酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.3；来源为家鼠的所述嘌呤核苷磷酸化酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.4；来源为智人的所述烟酰胺核糖激酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.5；来源为斯氏马里杆菌的所述聚磷酸激酶氨基酸序列为SEQ ID NO.6；来源为异常嗜糖气单胞菌的所述聚磷酸激酶氨基酸序列为SEQ ID NO.7；来源为耐辐射球菌的所述聚磷酸激酶氨基酸序列为SEQ ID NO.8。

3.如权利要求1所述的一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法，其特征在于，所述野生型大肠杆菌为大肠杆菌K12。

4.如权利要求3所述的一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法，其特征在于，所述突变型大肠杆菌为下述B1至B7中的任一种：

b1、将磷酸转移酶基因敲除；

b2、将腺苷酸转移酶基因敲除；

b3、将核糖核苷水解酶基因敲除；

B1、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1-b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；

B2、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；

B3、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b2改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；

B4、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1和b2改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；

B5、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；

B6、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1和b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；

B7、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b2和b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体。

5.如权利要求2所述的一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法，其特征在于，所述重组载体是将SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ IDNo.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的DNA分子替换载体pBAD-hisB的NcoI和EcoRI识别位点间的片段得到的重组载体。

6.如权利要求5所述的一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法，其特征在于，所述核糖-1-激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶及聚磷酸激酶通过含有核糖-1-激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶或聚磷酸激酶的重组载体导入所述受体菌中，所述含有核糖-1-激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶或聚磷酸激酶的重组载体中，启动所述核糖-1-激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶及聚磷酸激酶转录的启动子是ara启动子，终止所述核糖-1-激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶及聚磷酸激酶转录的终止子是rrnB终止子。

7.一种重组菌，其特征在于，根据上述权利要求1至6任一所述的用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法构建。