[发明专利]一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用

权利要求书

1.一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用，其特征在于，所述方法是通过检测蛋白的表达以达到诊断疾病的目的，或通过抑制或消除蛋白的活性、减少或去除蛋白以达到治疗疾病的目的。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蛋白由SEQ ID No：1所示的氨基酸序列组成；

或是在SEQ ID No：1所示的氨基酸序列中添加、替换或缺失1-n个氨基酸形成具有相同功能的蛋白，n为正整数；

或在SEQ ID No：1所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白；

或是与SEQ ID No：1所示的氨基酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的蛋白。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，编码所述蛋白的基因由SEQ ID No：2所示的核苷酸序列组成；

或是在SEQ ID No：2所示的核苷酸序列组成中添加、替换或缺失1-n个碱基生成的核苷酸序列，n为正整数；

或是与SEQ ID No：2所示的核苷酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的基因。

4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于，所述方法包括：

1)检测或抑制权利要求2所述蛋白的表达的方法；

2)使权利要求2所述蛋白失活的方法；

3)检测或干扰权利要求3所述基因的转录和翻译的方法；

4)使权利要求3所述基因失活的方法。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述方法包括：

能够检测权利要求2所述蛋白表达的抗体检测方法、能够检测权利要求3所述基因转录的PCR方法、能够去除权利要求3所述基因的基因编辑方法、能够去除权利要求3所述基因中编码权利要求2所述蛋白的ORF的全部序列或部分序列或使其产生移码突变序列的基因编辑方法、能够减少或去除权利要求3所述基因转录的RNA的RNAi方法、能够减少或去除权利要求3所述基因转录的RNA中编码权利要求2所述蛋白的ORF序列的RNAi方法、能够抑制权利要求3所述基因转录的RNA的抑制方法、能够降解权利要求3所述基因转录的RNA的降解方法、能够抑制权利要求2所述蛋白或抑制权利要求2所述蛋白与RAS结合的抑制方法、能够降解权利要求2所述蛋白的降解方法。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，

所述siRNA的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：4-SEQ ID No：15的任意一种所示；

所述shRNA表达质粒基于序列表中SEQ ID No：4-SEQ ID No：15的任意一种所示的序列构建，构建过程为：通过启动子启动shRNA的表达，并将shRNA表达序列构建至表达载体中得到；

所述gRNA的靶序列如序列表中SEQ ID No：16-SEQ ID No：90的任意一种所示。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述基因编辑方法为CRISPR/Cas9基因编辑方法。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述KRAS基因突变相关疾病为与KRAS基因突变相关的恶性肿瘤。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述与KRAS基因突变相关的恶性肿瘤包括：胰腺癌、结肠癌、肺癌、胃癌、胆管癌、子宫内膜癌、睾丸生殖细胞癌、宫颈癌、皮肤癌、多发性骨髓瘤和胶质瘤。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述KRAS基因突变包括：KRASG12A、G12C、G12D、G12F、G12R、G12S、G12V、G12Y、G13C、G13D、G15C、Q22K、S39Y、A59T、G60D、Q61H、Q61L、Q61R、Y64H、A146T、A146V突变中的至少一种。