[发明专利]一种BCR-ABL融合基因检测用试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及慢性粒细胞性白血病检测技术领域，尤其涉及一种BCR‑ABL融合基因检测用试剂盒及其应用。所述试剂盒包括：BCR‑ABL PCR反应液、内参基因PCR反应液、混合酶液、对照品液、参考品液。所述BCR‑ABL PCR反应液、内参基因PCR反应液、混合酶液的混合比例为3~4：3~4：1。本发明的这种试剂盒能够与实时荧光PCR技术配合，对外周血或骨髓血样本中提取的RNA中p190/p210/p230进行定量检测，具有检测结果准确、灵敏度高、稳定性好的特点，能够为恶性肿瘤的诊断、疗效监测、微小残留检测及预后提供重要依据。

技术领域

本发明涉及慢性粒细胞性白血病检测技术领域，尤其涉及一种BCR-ABL融合基因检测用试剂盒及其应用。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

慢性粒细胞性白血病(Chronic Myelognous Leukemia，CML)是一种发生在造血干细胞的血液系统恶性增殖性疾病，它的特点是产生大量不成熟的白细胞，这些白细胞在骨髓内聚集，抑制骨髓的正常造血；并且能够通过血液在全身扩散，导致病人出现贫血、容易出血、感染及器官浸润等。t(9；22)(q34；q11)是CML患者中常见的细胞遗传学异常，产生新的融合基因BCR-ABL。90％以上CML、5％～20％急性淋巴细胞白血病(ALL)都具有BCR-ABL融合基因，但少见于AML及其它血液学疾病。BCR-ABL融合基因编码的蛋白具有酪氨酸激酶活性，导致细胞恶性增殖。BCR-ABL断裂点的位置可影响疾病的表型，CML患者主要表达p210，而Ph阳性的ALL主要表达p190，p210阳性的患者常常也有少量的p190转录物的表达。分子生物学水平上的检测，对于恶性肿瘤的诊断、疗效监测、微小残留检测及预后起着非常重要的作用。但是目前市面上常用的BCR-ABL融合基因检测用试剂盒存在灵敏度低，稳定性差的问题。

发明内容

本发明的目的是实现对外周血或骨髓血样本中提取的RNA中p190、p210、p230的检测，以便于从分子生物学水平上进行恶性肿瘤的诊断，为此，本发明提供一种BCR-ABL融合基因检测用试剂盒及其应用，该试剂盒能够与实时荧光PCR技术配合，对外周血或骨髓血样本中提取的RNA中p190/p210/p230进行定量检测，该试剂盒灵敏度高，稳定性好。为实现上述目的，本发明公开如下的技术方案：

在本发明的第一方面，公开一种BCR-ABL融合基因检测用试剂盒，其包括BCR-ABLPCR反应液、内参基因PCR反应液、混合酶液、对照品液、参考品液。

进一步地，所述BCR-ABL PCR反应液、内参基因PCR反应液、混合酶液的混合比例为3～4：3～4：1，优选为4：4：1。

进一步地，所述BCR-ABL PCR反应液包括BCR-ABL1 p190反应液、BCR-ABL1 p210反应液和BCR-ABL1 p230反应液。

进一步地，按体积比计，所述BCR-ABL1 p190反应液包括如下组分：12.5μLhiscriptⅡU+OneStep qRT-PCR Probe Kit、1.25μL hiscriptⅡU+Enzyme Mixt、0.06μL曲拉通100、0.04μL异丙醇、0.4μL ROX内参、0.6μL BCR-ABL1 p190上游引物、0.6μL BCR-ABL1p190下游引物、0.4μL BCR-ABL1探针；其中所述BCR-ABL1 p190型上游引物的序列为SED IDNO.1所示的核苷酸序列；所述BCR-ABL1 p190型下游引物的序列为SED ID NO.2所示的核苷酸序列；所述ABL1探针的序列为SED ID NO.9所示的核苷酸序列。