[发明专利]致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法及应用，本发明基于MDV超强毒株Md5的BAC感染性克隆，利用Red两步同源重组的方法，成功构建meq和pp38双基因缺失的MDV毒株，命名为MZ‑1，该基因缺失毒株由于同时缺失了meq和pp38基因，克服了meq单基因缺失毒株引起的免疫抑制性，完全丧失了对SPF鸡的致病性以及致瘤性，具有更高的生物安全性，也具有优于CVI988/Rispens疫苗的免疫保护性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法及应用，即使在致病性MDV毒株基因组基础上构建meq与pp38双基因缺失株的方法及应用。

背景技术

近年来，随着马立克氏病病毒(Marek’s disease virus，MDV)毒力的不断进化，病毒有不断突破现有疫苗的免疫保护的趋势，因此需要研发新一代高效疫苗来应对病毒的挑战。现有的研究利用粘粒技术构建了MDV meq基因缺失株Md5BAC△meq，meq缺失毒株完全失去致瘤性的同时，能够抵抗MDV强毒株和特强毒株的攻击，提供了优于CVI988/Rispens的免疫保护效果。但meq基因缺失毒株仍然引起鸡体免疫抑制，因此，很难将其商品化。通过对Md5BAC△meq在CEF上进行传代致弱，能够消除其对鸡体的免疫抑制，但降低了免疫保护效果。

MDV的pp38基因位于基因组的长独特区和长内部重复区，该基因编码一个38kDa的磷酸化蛋白，因此命名为pp38。研究发现其在病毒溶细胞感染阶段高表达，重要的是，Md5BAC△pp38在鸡体内的早期复制能力降低，表明pp38可能参与淋巴细胞的早期溶细胞感染。现有的研究通过对病毒早期溶细胞感染的研究发现pp38基因的缺失对于B细胞的溶细胞感染和维持相关。病毒复制的早期溶细胞期直接与病毒引起宿主的免疫抑制相关。

上述这些研究无法证明pp38与meq基因同时缺失的相互作用关系，更缺乏pp38与meq基因双缺失的重组株的构建方法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种致病性重组MDV双基因缺失株的构建方法。

本发明的目的是提供一种致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法，敲除Md5BAC株基因组中meq和pp38基因，pp38基因序列如SEQ ID No.9所示，meq基因序列如SEQID No.10所示。该毒株被命名为MZ-1株，该株病毒对SPF鸡无免疫抑制等致病性，同时对MDV超强毒株具有很好的免疫保护效果。

meq基因序列，SEQ ID NO.9