[发明专利]致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法及应用

权利要求书

1.致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法，其特征在于，敲除Md5BAC株基因组中meq和pp38基因，pp38基因序列如SEQ ID No.9所示，meq基因序列如SEQ ID No.10所示。

2.根据权利要求1所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法，其特征在于，meq是MDV致肿瘤性基因和pp38是MDV早期复制相关基因，敲除方法具体包括：

(1)用卡那基因取代MDV Md5BAC毒株中的meq基因，并筛选不具有Kana抗性的细菌克隆，得到含Md5BAC△meq质粒的细菌克隆；

(2)以含Md5BAC△meq质粒的细菌克隆为出发菌株，参考上述(1)步骤，敲除pp38基因，得到致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株。

3.根据权利要求2所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法，其特征在于，用卡那基因取代MDV Md5BAC毒株中的meq基因的具体方法如下：

构建Md5的BAC感染性克隆Md5BAC质粒，并转化入感受态细胞；

合成引物SEQ ID No.1、SEQ ID No.2，并以含有Kana基因的质粒为模板，PCR扩增得到含有meq基因两端同源臂的Kana基因片段；

将含有meq基因两端同源臂的Kana基因片段电转化进含有Md5BAC质粒的感受态细胞，复苏，筛选出氯霉素、卡那霉素双抗的阳性菌落，阳性菌落经阿拉伯糖处理，诱导重组酶的表达后，选择在氯霉素、卡那霉素平板不生长，而只在氯霉素平板上生长的单菌落，即完成Kana基因取代MDV Md5BAC毒株中的meq基因。

4.根据权利要求3所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法，其特征在于，用卡那基因取代MDV Md5BAC毒株中的meq基因的步骤需要重复一次。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法构建的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株。

6.根据权利要求5所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法的应用，其特征在于，所述致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株及其类似物用于制备诱导抗MDV毒株保护性免疫的产品。

7.根据权利要求6所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法的应用，其特征在于，所述诱导抗MDV毒株保护性免疫的产品针对禽类。

8.根据权利要求7所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法的应用，其特征在于，所述禽类为鸡。

9.根据权利要求6所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法的应用，其特征在于，所述致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株及其类似物用于制备马立克氏病疫苗。

10.根据权利要求4所述的致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株构建方法的应用，其特征在于，所述致病性MDV的meq与pp38双基因缺失株及其类似物用于制备马立克氏病毒活载体疫苗。