[发明专利]lncRNA-WEE2-AS1中m6A甲基化水平作为胶质瘤标志物的应用

说明书

本发明涉及lncRNA‑WEE2‑AS1中m⁶A甲基化水平作为胶质瘤标志物的应用。本发明通过高通量测序筛选确认了lncRNA‑WEE2‑AS1中m⁶A甲基化修饰水平与脑胶质瘤的预后状况相关，甲基化丰度及表达水平的提高意味着更差的预后。另外，本发明研究证实lncRNA‑WEE2‑AS1的表达与抗肿瘤药物的耐药形成相关，抑制所述lncRNA的表达有助于改善达沙替尼耐药，为临床靶向治疗耐药的患者提供了可行的治疗方案。

技术领域

本发明属于脑胶质瘤标志物及治疗药物技术领域，具体涉及lncRNA-WEE2-AS1中m⁶A甲基化水平作为胶质瘤标志物的应用及lncRNA-WEE2-AS1抑制剂作为达沙替尼增敏剂的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

胶质母细胞瘤(GBM)是在脑肿瘤中侵袭性最强，预后最差的致命性肿瘤。目前胶质母细胞瘤的标准治疗措施为手术，术后同步口服化疗药物替莫唑胺及同步的放疗，但患者的中位生存期大约为14个月左右。因此，寻找针对胶质瘤治疗的新靶点及新策略至关重要。

近期研究证据表明，长非编码RNAs(lncRNAs)作为基因表达的关键调控因子，在表观遗传、转录和转录后水平上与肿瘤相关的基因表达有着复杂的调控关系，这与肿瘤的发生和恶性进展密切相关。lncRNAs的组织特异性和条件特异性表达模式表明它们是潜在的生物标志物，并为临床上针对它们提供了理论基础。N6-甲基腺苷(m⁶A)代表了真核生物中最普遍的mRNA和lncRNA的甲基化修饰，它几乎调节了mRNA代谢的各个方面，包括RNA的剪接、翻译、稳定性和降解，在转录后水平调节基因表达。鉴于m⁶A甲基化修饰在正常生物过程中的功能重要性，越来越多的验证研究表明，RNAm⁶A修饰的失调也有助于GBM的启动、进展和耐药。然而，到目前为止，m⁶A修饰在lncRNA中的分布和功能，特别是升高的lncRNA在GBM组织中的作用，还没有被完全揭示。了解m⁶A调控的lncRNAs在GBM发病机制中的作用，将为GBM患者的临床诊断和靶向治疗提供重要的理论依据。同时，选择针对该lncRNA的靶向药物及干扰RNA治疗方式，将为胶质母细胞瘤的治疗带来新的方式。

发明内容

本发明通过高通量测序对脑胶质瘤相关的lncRNAs进行筛选，获得了与胶质瘤较差预后相关的lncRNA-WEE2-AS1，本发明证实了该lncRNA的甲基化修饰与胶质瘤的发展具有相关性，并明确了相应的调控机制，提供了该lncRNA的甲基化作为一种胶质瘤标志物的应用。另外，为了明确上述lncRNA在临床治疗方面的应用，本发明还探究了该lncRNA表达与临床药物的关系，抑制该lncRNA的表达有助于提高相应药物的敏感性，有助于改善临床耐药。

基于上述研究成果，本发明提供以下技术方案：

本发明第一方面，提供lncRNA-WEE2-AS1中m⁶A甲基化水平作为胶质瘤标志物的应用。

本发明首次通过m⁶A高通量测序(m⁶A-seq)报道了GBM组织中m⁶A修饰的lncRNAs与正常脑组织相比具有高度特异性，其中，lncRNA-WEE2-AS1在m⁶A修饰水平和转录水平都明显上调，其高表达与GBM的预后较差相关。在功能上，本发明证实WEE2-AS1在体外和体内促进GBM的发病机制和恶性发展。在机制上，METTL3介导了WEE2-AS1的m⁶A修饰，并以IGF2BP3依赖的方式增强其表达。此外，WEE2-AS1通过阻止CUL2介导的RPN2 K322泛素化促进RPN2蛋白稳定，从而通过激活AKT信号通路促进GBM恶性进展。