[发明专利]一种检测人NRAS基因突变的引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种检测人NRAS基因突变的引物和探针，其特征在于，针对2号外显子上的Codon12突变G12D的引物和探针的序列为：

正向引物NF1：5′-TGCTGGTGTGAAATGACTG-3′；

反向引物NR1：5′-CTGGATTAGCTGGATTGTCA-3′；

检测探针NP1：5′荧光基团-AACACCATCTGCTC-3′猝灭基团；

封阻探针NB1：5′-CGCTTTTCCCAACACCACCTGCT-3′phosphorylation；

针对2号外显子上的Codon13突变G13D的引物和探针的序列为：

正向引物NF2：5′-GGTGTGAAATGACTGAGTACA-3′；

反向引物NR2：5′-TGGTTCTGGATTAGCTGGA-3′；

检测探针NP2：5′荧光基团-CAAC+A+T+CACCTGCT-3′猝灭基团；

封阻探针NB2：5′-CGCTTTTCCCAACACCACCTGCT-3′phosphorylation；

针对3号外显子上的Codon61突变Q61K的引物和探针的序列为：

正向引物NF3：5′-AAACCTGTTTGTTGGACAT-3′；

反向引物NR3：5′-ATTGGTCTCTCATGGCACT-3′；

检测探针NP3：5′荧光基团-CTCTTCT+T+T+TCCAGC-3′猝灭基团；

封阻探针NB3：5′-CTTCTTGTCCAGCTGTATCCAGTATGT-3′phOsphOrylation；

针对3号外显子上的Codon61突变Q61R的引物和探针的序列为：

正向引物NF4：5′荧光基团-CTCTTCTCGTCCAG-3′猝灭基团；

反向引物NR4：5′-ATTGGTCTCTCATGGCACT-3′；

检测探针NP4：5′荧光基团-CTCTTCT+T+T+TCCAGC-3′猝灭基团；

封阻探针NB4：5′-CTTCTTGTCCAGCTGTATCCAGTATGT-3′phosphorylation。

2.根据权利要求1所述检测人NRAS基因突变的引物和探针，其特征在于，所述荧光基团为FAM、HEX、VIC、ROX或CY5；

所述猝灭基团为MGB、BHQ1或BHQ2。

3.一种检测人NRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物和探针，还包括内参体系，所述内参体系引物和探针的序列为：

正向引物GF1：5′-GCTCCCTCTTTCTTTGCAG-3′；

反向引物GR1：5′-AGTCCTTCCACGATACCAA-3′；

内参探针GP1：5′荧光基团-TCCTGCACCACCAACTGCTTAG-3′猝灭基团。

4.根据权利要求3所述检测人NRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为FAM、HEX、VIC、ROX或CY5；

所述猝灭基团为MGB或Taqman探针。

5.根据权利要求3所述检测人NRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括10×dPCR Buffer和dPCR酶。

6.根据权利要求5所述检测人NRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述10×dPCRBuffer包括Mg²⁺、dNTP；

所述dPCR酶包括Taq酶和UDG酶。

7.根据权利要求6所述检测人NRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述dNTP包括dATP、dGTP、dCTP和dUTP。

8.根据权利要求3所述检测人NRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括微流控芯片，所述微流控芯片中的微腔室用于承载PCR反应体系进行PCR扩增反应。

9.根据权利要求3所述检测人NRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括油相A和油相B，按照1∶3的体积比混合后，通过50℃的加热后凝固，用于封闭微流控芯片中的微腔室。