[发明专利]一种肝细胞癌筛选检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种肝细胞癌筛选检测方法及其应用，以特征基因TP53I3为肝细胞癌标志物，通过检测肝细胞癌组织样本中特征基因TP53I3的表达量实现筛选检测肝细胞癌，并将对该特征基因TP53I3的检测应用于一种肝细胞癌筛选检测与预后评估试剂盒，所述试剂盒包括特征基因TP53I3基因的引物组分以及所采用检测方法对应的辅助试剂，该试剂盒通过检测特征基因TP53I3基因的表达量，应用于肝细胞癌筛选检测与预后评估，本发明公开了一种新的肝细胞癌标志物：特征基因TP53I3，在肝细胞癌辅助诊断、预后评估和治疗领域具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，特别涉及一种肝细胞癌筛选检测方法及其应用。

背景技术

肝癌是发生于肝细胞的恶性肿瘤。2021年CA杂志报道全球肝癌约有90.71万新发病例和82.17万死亡病例死亡率为8.3％，在所有肿瘤类型中位列第三。根据起源，肝癌可分为原发性和继发性两种。原发性肝癌主要分为肝细胞癌(75-85％)和肝内胆管癌(10-15％)两类。致瘤机制不明确、缺乏早期诊断标志物和非特异性治疗手段是肝细胞癌的最大特点，有效的治疗很大程度上依赖于对肝细胞癌的早期发现和治疗。

肝细胞癌通常在长期患有肝病的患者中发生，大部分患者没有症状，由筛查而被诊断。筛查分成高危人群筛查和肿瘤本身针对性的筛查。高危人群筛查是针对长期慢性乙肝病人、有肝硬化的病人、患有丙肝的病人等这些肝癌的易发高危人群的筛查。另一部分需要重点关注的人群是那些肝脏已经出现了可疑的病变，但是又没有明确是肿瘤的病人。肝细胞癌的针对性检查主要分为影像学检查和实验室检查。影像学检查最常用的是体表超声这种经济实用的方法，但它对检查医生的经验和水平以及对设备要求比较高。另外，必要的时候还会采用增强CT或者核磁等。对于实验室检查，主要包括肝功能检查、血常规检查以及肿瘤标志物检查等。

目前临床上正在使用的肝细胞癌相关的肿瘤标志物包括甲胎蛋白(AFP)和异常凝血酶原(DCP)等,但尚无单一标志物可诊断肝细胞癌。

AFP是一种糖蛋白，正常情况下这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生约两周后AFP从血液中消失，因此正常人血清中AFP的含量不到20ng/mL。但当肝细胞发生癌变时，又恢复了产生这种蛋白质的功能。所以AFP是迄今为止最广泛用于HCC筛查、早期诊断以及疗效和预后评估的生物标志物。使用常用的HCC阳性截止值(AFP水平≥20ng/mL)时，AFP的敏感度为41-65％，特异度为80-94％。但AFP阴性(20ng/mL)率在52％的小HCC(3cm)患者及53.5％的TNM I期患者中发现，表明近一半的HCC患者AFP阴性，尤其是早期和小HCC，作为肝细胞癌的早期筛查指标不理想。

DCP在肝脏合成，当维生素K缺乏或服用某些抗凝药物时异常升高，DCP是肝脏在合成凝血酶原过程中前体羧化不完全所致，所以全称脱-γ-羧基凝血酶原。当肝细胞发生癌变、羧化酶基因表达水平下降或者肝细胞内存在羧化酶抑制剂时患者血清DCP含量升高，是伴随肝癌特异产生的异常凝血酶原。使用常用的HCC阳性截止值(DCP≥40mAU/mL)诊断早期肝细胞癌的灵敏度和特异性分别为64％和89％，准确度为86.3％。但患者维生素K缺乏、饮酒或者服用华法林等抗凝剂均可导致DCP的异常升高。

因此，研究开发一种高特异性和高灵敏性的标志物用于肝细胞癌的诊断，对于肝细胞癌的诊断和治疗具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝细胞癌筛选检测方法及其应用，通过特征基因TP53I3能够识别或鉴定肝细胞癌，用于肝细胞癌筛选检测与预后评估，以及其在检测试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种肝细胞癌筛选检测方法，所述方法是以特征基因TP53I3为肝细胞癌标志物，通过检测肝细胞癌组织样本中所述特征基因TP53I3的表达量实现筛选检测肝细胞癌。

进一步地，所述方法包括以下步骤：