[发明专利]石佛翠茶多糖及其提取方法和应用

说明书

本发明公开了一种石佛翠茶多糖及其提取方法和应用，提取方法包括将石佛翠茶叶烘干和粉碎过筛，得茶粉，经脱脂、脱色，将所得预处理的茶粉与复合酶加入磷酸缓冲液中酶解，酶解产物钝化、离心，第一上清液pH回调，沉淀加入水中升温反应得水提产物，水提产物经离心，第二上清液pH回调后与第一上清液混合蒸发浓缩，加入无水乙醇，静置后离心，沉淀烘干并除蛋白，静置、离心，第三上清液回调至中性，经透析、蒸发浓缩和冷冻干燥，得石佛翠茶多糖。本发明制备的石佛翠多糖在体外表现出良好自由基清除效率，对自由基损伤导致的细胞活性降低表现出很好的改善效果并在细胞水平上对氧化损伤有修复作用，在食品、药品、化妆品等领域有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于天然产物多糖应用技术领域，涉及一种石佛翠茶多糖及其提取方法和应用，具体涉及一种夏秋茶树鲜叶多糖-石佛翠茶多糖及其提取方法和在氧化损伤细胞修复上的新应用。

背景技术

细胞内天然存在的各种活性氧(ROS)自由基主要产生于各个组织和细胞的线粒体部位，但是线粒体也是细胞内对细胞生理变化最为敏感的细胞器之一，一旦细胞受到不同理化因素的胁迫就会抑制线粒体功能，表现为线粒体形态断裂，膜电位消和甚至产生更多的ROS。ROS(尤其是H₂O₂和·OH)作为一种小分子可以自由的穿过细胞质膜进出细胞，因此，无论是外源性摄取还是内源性诱导的自由基的积累都会引起细胞病理状态的生成，例如衰老、神经性衰退和癌症等。外源性氧化物质引起细胞的氧化损伤也会反应在细胞内的各种抗氧化酶的水平上，不同来源多糖的抗氧化活性也会表现出对抗氧化酶活性的提升。抗氧化活性往往与抗衰老、免疫调节活性、降血糖以及抗肿瘤等生物学功能息息相关，尤其是免疫调节活性，因为氧自由基与某些生理活性物质的调控和炎症免疫过程有重要关系，在病理情况下，自由基引起的细胞氧化损伤同样也会作用于免疫系统，引起免疫功能降低。

在茶多糖多方面的生理活性中，茶多糖的降血糖活性最为人们所熟知，除此以外，茶多糖的抗氧化活性也是人们所津津乐道的，多糖作为一种多羟基的化合物，抗氧化活性是多糖的天然属性。虽然对茶多糖抗氧化活性的研究也较多，但总是存在一定争议，茶多糖作为一类复杂的天然大分子，它的生物活性容易受到诸多方面的影响，大到栽培环境、茶树品种，小到采样部位、采样季节、成品茶制作方法，甚至是提取的工艺手段都会影响到茶多糖的生物活性。皖西南作为徽茶的主要产地，栽种了很多国家级的优良品种，本项目中所用石佛翠(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze cv.‘Shifocui’)品种于1989年开始选育，到2010年被确定为国家级优良品种。目前为止，该品种茶树资源仅用于春茶生产，但其优异的抗寒性质使得该品种茶树的夏秋茶和越冬代茶叶资源盛产，然而对该品种茶树功能成分的研究尚未见报道。

热水提取法是最常用的方法，该方法具有简单、方便、成本低等优点，缺点是耗时长、产率低，然而植物多糖作为植物细胞内含物需要破碎细胞壁才能溶出，因此需要参与辅助水提醇沉的方法，常见的有酸提、碱提、超声辅助等。本申请的发明人发现，石佛翠作为抗寒优良品种，其细胞壁的纤维素和果胶成分含量相对其他茶树品种要高很多，基于酶的高效性，因此利用酶辅助法提取石佛翠多糖具有可行性。而酶的使用方法及其后续的水提醇沉方法均会影响茶多糖活性。

因此，基于生物活性，利用合理的提取手段可得到高活性的茶多糖，进行系统深入的药理作用研究是之后的研究方向，以期为皖西南地区茶多糖产品的开发和茶资源高值化提供一定理论依据，提高资源利用率，帮助解决皖西南茶区夏秋茶、茶树花弃采严重造成的茶农经济效益低的问题。另外，基于茶叶功能成分良好的应用前景，国内外研究者针对特异性的功能成分的品种选育已经取得了一定的成效，但基于优质茶多糖种质资源的报道较少。因此进一步探究茶多糖的开发应用对于高多糖的茶树品种的选育工作也具有一定的指导意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种具有良好的自由基清除效率、对自由基损伤导致的细胞活性降低表现出很好的改善效果并在细胞水平上对氧化损伤有修复作用的石佛翠茶多糖及其提取方法和应用。