[发明专利]反式-1,2-二氨甲基环丁烷与其顺式异构体的分离检测方法

权利要求书

1.反式-1,2-二氨甲基环丁烷或其盐中所含顺式异构体或顺式异构体盐的检测方法，其特征在于：将待测样品与具有紫外吸收的衍生化试剂进行衍生化反应，然后采用HPLC对顺式异构体或其盐进行定性和/或定量检测，色谱柱填充剂为表面涂敷直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶，流动相溶剂为正己烷与异丙醇的混合溶剂，其中正己烷：异丙醇体积比为(88：12)～(92：8)。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱为CHIRALPAK AD-3、CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AD中至少一种或其等效色谱柱；优选地，所述色谱柱为CHIRALPAK AD-H或其等效色谱柱。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱CHIRALPAK AD-H的内径为2.1～20mm，长度为10～250mm，填料粒径为5μm；优选地，所述色谱柱CHIRALPAK AD-H的内径为4.6mm；优选地，所述色谱柱CHIRALPAK AD-H的长度为100～250mm；优选地，所述色谱柱CHIRALPAK AD-H的长度为250mm。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述流动相溶剂为正己烷与异丙醇的混合溶剂，其中正己烷：异丙醇体积比为(89：11)～(91：9)；优选地，所述流动相溶剂为正己烷与异丙醇的混合溶剂，其中正己烷：异丙醇体积比为90：10。

5.如权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于：流动相中添加了扫尾剂；优选地，所述扫尾剂为胺类扫尾剂；优选地，所述扫尾剂为二乙胺；优选地，流动相中添加了体积分数占所述流动相溶剂0.08％～0.12％的二乙胺；优选地，流动相中添加了体积分数占所述流动相溶剂0.1％的二乙胺。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：流速为0.6～1.0mL/min；优选地，流速为0.6～0.8mL/min；优选地，流速为0.6mL/min或0.8mL/min。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：满足以下至少一项：柱温为28～32℃；优选地，柱温为30℃；检测波长为235±5nm；优选地，检测波长为235nm。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：供试品溶液的制备包括以下衍生化步骤：将待测样品与间甲基苯甲酰氯进行酰化反应，生成酰胺化合物；

优选地，每10mg待测样品与40～160μL间甲基苯甲酰氯进行酰化反应；

优选地，每10mg待测样品与100μL间甲基苯甲酰氯进行酰化反应；

优选地，供试品溶液浓度为0.8～1.2mg/ml；

优选地，供试品溶液浓度为1.0mg/ml；

优选地，供试品溶液的制备方法如下：每10mg待测样品中加入1.0M氢氧化钠水溶液0.5mL溶解，再加入间甲基苯甲酰氯100μL，反应结束后加入稀释剂至总体积10mL，提取反应产物，收集上层，即得供试品溶液；

优选地，制备供试品溶液的稀释剂是所述流动相溶剂。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于：进样量为10～20μL；优选地，进样量为10μL。

10.如权利要求1～9任意一项所述的检测方法，其特征在于：所述反式-1,2-二氨甲基环丁烷为或其混合物；

所述顺式异构体为

所述反式-1,2-二氨甲基环丁烷的盐和/或所述顺式异构体的盐为盐酸盐。