[发明专利]一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌的制备方法及应用

说明书

本发明提供一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌的制备方法及应用，制备方法包括以下步骤：将乳酸菌接种于培养基中进行培养，得到种子液；将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，在发酵稳定初期终止发酵，得到发酵液；将发酵液离心得到菌体；将菌体和缓冲液混合得到菌悬液，然后对菌悬液进行冷应激处理，得到冷应激处理后的菌悬液；将冷应激处理后的菌悬液稀释后培养，得到菌体；重复以上步骤，得到具有高抗氧化应激性能的乳酸菌。采用本发明提供的制备方法提高了乳酸菌的抗氧化应激性能，通过在制备过程中进行多因素亚致死胁迫处理，筛选综合抗逆性良好的菌体。

技术领域

本发明属于乳酸菌技术领域，具体涉及一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌的制备方法及应用。

背景技术

自由基和活性氧导致的氧化应激和损伤与机体大部分疾病都有或多或少的关系。虽然在机体内有一套有效的内源性抗氧化系统，但其抗氧化调节能力有限，特别是氧化应激比较严重时，必须依靠补充外源性的抗氧化剂。

乳酸菌与人们生活紧密相关，具有抗氧化功能的乳酸菌可作为天然抗氧化剂，在体内摄入此类乳酸菌对机体或细胞的氧化应激具有显著的调节作用。许多乳酸菌都具有抗氧化的功能，然而大部分菌株抗逆性差，在不利的环境下，会降低其活性、活力等，不能确保其使用效果。

乳酸菌从生产加工过程到摄入机体消化道中会遇到各种各样的环境应力，如热胁迫、冷胁迫、酸胁迫、胆盐胁迫、氧胁迫、渗透压胁迫等。乳酸菌具有一定的耐受能力，为了应对各种胁迫，乳酸菌会产生一定的应激反应。当不利环境引起菌体内部失衡时，菌体为了保持细胞的稳定性，会调动各种机制来应对环境胁迫。

有研究表明，细菌的一种应激反应可以提高对另外一种或几种不利环境的耐受能力。这种现象打破了之前普遍认为的经受过一种胁迫处理损害的细胞对其他的胁迫更为敏感的认知。目前对乳酸菌的胁迫筛选，一般是正常生长到一定阶段，然后对细胞进行不同的单因素胁迫处理，然后测定筛选后的细胞在其他胁迫条件下的耐受力，最终获得综合抗逆性良好的菌株。此方法较为复杂，且不一定能获得目标菌体，也不能确保后续大生产放大的适配性。

因此，如何提供一种乳酸菌的制备方法，使其不仅可以简化综合抗逆性菌株的筛选方法，而且可以确保后期放大生产的可行性，成为目前亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌的制备方法及应用。采用本发明提供的制备方法提高了乳酸菌的抗氧化应激性能，通过在制备过程中进行多因素亚致死胁迫处理，筛选综合抗逆性良好的菌体，简化了现有技术中筛选综合抗逆性良好的乳酸菌菌株的方法，解决了乳酸菌应用范围小和使用功效不稳定的问题。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将经过活化的乳酸菌菌种于培养基中进行培养，得到种子液；

(2)将步骤(1)得到的种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，在发酵稳定初期终止发酵，得到发酵液；

(3)将步骤(2)得到的发酵液离心，得到菌体；将菌体和缓冲液混合，得到菌悬液，然后对菌悬液进行冷应激处理，得到冷应激处理后的菌悬液；

其中，所述缓冲液中包括过氧化氢；

(4)将步骤(3)得到的冷应激处理后的菌悬液进行梯度稀释，将梯度稀释后得到的稀释菌液涂布在平板上进行培养，筛选典型菌落，得到菌体；

(5)将步骤(4)得到的菌体重复步骤(1)-(4)的操作，得到具有高抗氧化应激性能的乳酸菌。

在本发明中，所述乳酸菌包括植物乳杆菌和/或乳酸片球菌。