[发明专利]一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌的制备方法及应用

权利要求书

1.一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将经过活化的乳酸菌菌种于培养基中进行培养，得到种子液；

(2)将步骤(1)得到的种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，在发酵稳定初期终止发酵，得到发酵液；

(3)将步骤(2)得到的发酵液离心，得到菌体；将菌体和缓冲液混合，得到菌悬液，然后对菌悬液进行冷应激处理，得到冷应激处理后的菌悬液；

其中，所述缓冲液中包括过氧化氢；

(4)将步骤(3)得到的冷应激处理后的菌悬液进行梯度稀释，将梯度稀释后得到的稀释菌液涂布在平板上进行培养，筛选典型菌落，得到菌体；

(5)将步骤(4)得到的菌体重复步骤(1)-(4)的操作，得到具有高抗氧化应激性能的乳酸菌。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述培养基包括MRS液体培养基，所述培养的温度为37±1℃；

所述MRS液体培养基按质量浓度计包括以下组分：蛋白胨5-10g/L、酵母浸粉5-10g/L、牛肉膏5-10g/L、葡萄糖15-20g/L、柠檬酸三铵2-5g/L、乙酸钠2-3g/L、磷酸氢二钾2-5g/L、硫酸镁0.2-0.5g/L、硫酸锰0.05-0.2g/L和吐温-80 0.8-1.2g/L；所述MRS液体培养基的溶剂为水，所述MRS液体培养基的pH为6.4±0.2。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述发酵培养基按质量浓度计包括以下组分：酪蛋白胨10-15g/L、酵母浸粉10-15g/L、葡萄糖5-10g/L、麦芽糖14-18g/L、柠檬酸三铵4-8g/L、乙酸钠4-6g/L、磷酸氢二钾5-8g/L、硫酸镁0.2-0.6g/L、硫酸锰0.1-0.3g/L、吐温-80 0.8-1.2g/L、猪胆盐0.01-0.02g/L和氯化钠60-80g/L；所述发酵培养基的溶剂为水，pH自然。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述发酵培养的条件为：接种前控制发酵培养基pH为4.5-5.5，发酵过程中控制发酵培养基的pH为3.5-4.5，发酵温度40-45℃，发酵过程中搅拌速度为40-80r/min，发酵至稳定初期降温至20℃以下。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述缓冲液按质量浓度计包括以下组分：磷酸氢二钾6-10g/L、磷酸二氢钠6-10g/L、氯化钠60-100g/L和过氧化氢20-40mg/L；所述菌体和缓冲液的质量比为1:(1-2)。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述冷应激处理包括以下步骤：将菌悬液在2-6℃预处理40-80min，然后在-85～-75℃冷冻2-4h，之后在37±1℃放置直至菌悬液融化，如此往复3～6次。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，步骤(1)-(4)的重复次数为30-50次。

8.一种具有高抗氧化应激性能的乳酸菌菌粉，其特征在于，所述具有高抗氧化应激性能的乳酸菌菌粉是由包括以下步骤的制备方法制得的：将采用权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的具有高抗氧化应激性能的乳酸菌继续培养，再依次经过离心、乳化和冻干，得到具有高抗氧化应激性能的乳酸菌菌粉。

9.根据权利要求8所述的具有高抗氧化应激性能的乳酸菌菌粉，其特征在于，所述乳化包括以下步骤：将离心得到的菌体和保护剂按照质量比为1:(0.5-1.5)的比例混合，得到乳化液；所述保护剂按质量百分含量计包括海藻糖10-20％、蔗糖2-5％、脱脂乳2-5％、甘油2-4％、谷氨酸钠2-4％和抗环血酸0.5-1％，所述保护剂的溶剂为水。

10.一种根据权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的具有高抗氧化应激性能的乳酸菌或根据权利要求8或9所述的具有高抗氧化应激性能的乳酸菌菌粉在制备具有高抗氧化益生菌产品中的应用。