[发明专利]一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法

说明书

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法，即在第一试剂中改变非小而密脂蛋白的溶解特性，使其易于被清除并在第二试剂中特异性的定量小而密脂蛋白胆固醇(sdLDL‑C)的方法。本发明所述试剂包括第一试剂：10mmol/L～300mmol/L离液离子化合物、0.1～1.0％聚乙二醇、1.0～90mmol/L二价金属离子、1～10KU/L胆固醇酯酶、1～10KU/L胆固醇氧化酶、100～300KU/L过氧化氢酶、0.2～10mmol/L Trinder’s色原化合物、和0.05～3％表面活性剂A；第二试剂：0.1～10mmol/L4‑氨基安替比林、0.2～10KU/L过氧化物酶、0.01～0.3％叠氮钠和0.05～3％表面活性剂B，试剂无需采用磷脂酶，配制简单，能够应用于特异性检测sdLDL。其测定方法能够应用于全自动生化分析仪，特定、专一地定量试样中sdLDL的含量。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法。

背景技术

低密度脂蛋白(LDL)具有异质性，由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组成。一般将LDL亚组份中颗粒较小密度较大的LDL称小而密LDL(smalldense Low-DensityLipoprotein，sdLDL)；将颗粒较大、密度较小的LDL称大而轻LDL；介于二者之间的亚组份为中密度LDL。

近来研究发现sdLDL与普通LDL相比，sdLDL致动脉粥样硬化的能力更强，是公认的引发心血管病的重要危险因素之一，已被美国胆固醇教育计划(National CholesterolEducation Program，NCEP)委员会成人治疗组列入新发现的重要心血管病危险因素之一。

目前在临床检测应用中，测定sdLDL的方法有电泳法、超速离心法和分级沉淀法等。但这些方法检测时间很长，不能进行大规模自动化检测，且需要昂贵的仪器设备，故不能应用于一般的临床医学检测。近几年来出现了采用表面活性剂和磷脂酶清除试样中非小而密脂蛋白胆固醇，但该类方法采用磷脂酶，价格昂贵，国内尚无生产该酶的企业。

申请号为201810803320.9的中国专利公开了一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒，其组合物包括聚乙二醇、表面活性剂A和脂蛋白酯酶，其采用与脂蛋白结合的聚阴离子化合物、脂蛋白酯酶和表面活性剂的组合，能够在第一试剂中排除乳糜颗粒的干扰，从而实现测定sdLDL的目的，所用试剂配制简单方便，能够高效、准确地应用于所述方法中进行特异性检测sdLDL。

但现有技术中并未对如何分散血液中的脂蛋白进行分析，其测试准确性有待进一步提高。

发明内容

针对目前对小而密脂蛋白的检测方法的不足，本发明提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法，即在第一试剂中采用表面活性剂A、离液离子化合物和聚乙二醇(PEG)，清除非小而密脂蛋白胆固醇，本发明所述的试剂无需使用磷脂酶，配制简单，能够高效、准确地定量试样中sdLDL。本发明所述的测定方法，能够特定、专一地检测小而密脂蛋白(sdLDL)，该测定方法可靠性高、成本低，能够大规模特异性地检测试样中sdLDL。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，包括在第一试剂中添加离液离子化合物、表面活性剂A和胆固醇酯酶，所述离液离子化合物通过电荷作用对脂蛋白进行分散，以使表面活性剂A和胆固醇酯酶选择性地作用于特定脂蛋白，从而达到测量特定脂蛋白中胆固醇的量。

本发明所述离液离子化合物选自溴化钠、硫氰酸钠、碘化钾中的一种或两种，所述离液离子化合物的含量为10mmol/L～300mmol/L，较佳地为10mmol/L～200mmol/L。

本发明所述第一试剂中Trinder’s色原化合物的含量为0.2～10mmol/L，较佳地为0.50～5.0mmol/L，更佳地为2.0～3.0mmol/L。