[发明专利]一种细胞交叉污染检测方法及其应用

权利要求书

1.一种细胞交叉污染检测方法，其特征在于包括如下步骤：

S1：制备细胞交叉污染样本，并进行细胞DNA提取；

S2：根据位点信息设计引物建立多重PCR扩增体系；

S3：文库构建成功后进行高通量测序分析；

S4：按照判定标准，确认细胞是否存在交叉污染。

2.根据权利要求1所述的一种细胞交叉污染检测方法，其特征在于：步骤S2中，在131个微单倍型位点上拆分成172个扩增片段，每个扩增片段均包括一个正向引物和一个反向引物，正向引物和反向引物的序列为SEQ ID No.1-SEQ ID No.344。

3.根据权利要求2所述的一种细胞交叉污染检测方法，其特征在于：步骤S2中，共进行两轮PCR反应，第1轮多重PCR反应分为2个反应管进行，第1轮PCR扩增后，将2个反应管的PCR产物合并，经磁珠纯化后，进行第2轮多重PCR反应；取第2轮多重PCR反应产物磁珠纯化后，吸取上清液，并将其转移到新的PCR管中，即为制备的多重PCR文库。

4.根据权利要求1所述的一种细胞交叉污染检测方法，其特征在于：已知单一细胞样本测序分型结果，步骤S4的结果判定标准如下：与单一细胞样本分型结果比较，若检测到单一细胞样本不存在的基因型，即可判断培养细胞存在细胞交叉污染。

5.根据权利要求1所述的一种细胞交叉污染检测方法，其特征在于：未知单一细胞样本测序分型结果，步骤S4的结果判定标准如下：至少两个基因座出现三个及三个以上等位基因时，或者该检测体系中两个以上扩增片段出现多于3个基因型，即可判断培养细胞存在细胞交叉污染。

6.权利要求1-5所述的任意一种细胞交叉污染检测方法，在细胞制剂的质量控制中的应用。

7.权利要求1-5所述的任意一种细胞交叉污染检测方法，在细胞库对储存细胞系质量的监测中的应用。