[发明专利]用于检测犬片状边虫与巴贝斯虫的引物探针组合物、核酸检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供用于检测犬片状边虫与巴贝斯虫的引物探针组合物、核酸检测试剂盒及其制备方法，所述引物探针组合物包括用于检测犬片状边虫的上游引物、用于检测犬片状边虫的下游引物、用于检测犬片状边虫的荧光探针、用于检测犬巴贝斯虫的上游引物、用于检测犬巴贝斯虫的下游引物、用于检测犬巴贝斯虫的荧光探针、外参照的上游引物、外参照的下游引物、外参照的荧光探针。本发明引物和探针具有较高的保守性，与其他病原体不存在交叉反应。本发明核酸检测试剂盒特异性强、灵敏度高。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，具体涉及用于检测犬片状边虫与巴贝斯虫的引物探针组合物、核酸检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

犬片状边虫（ Anaplasma platys）是引起犬周期性血小板减少症的病原虫，主要是热带及温暖地区的犬易受影响，是一种广泛传播的疾病，革蜱属被认为属犬片状边虫的传播媒介。片状边虫感染的症状包括发烧、食欲减退，嗜睡，凝血异常及中度贫血等症状。目前用于片状边虫诊断的方法包括血液抹片，血清诊断及分子诊断。

犬巴贝斯虫病是由于巴贝斯虫（ Babesiagibsoni）寄生在宿主犬的红细胞中引起的一种严重的血液原虫疾病，能会造成的症状有发热、贫血、黄疽、脾肿大、血红蛋白尿、可视粘膜苍白等，重的可伴随急性肾衰、急性呼吸窘迫综合症，弥散性血管内凝血，肝病及神经综合症。巴贝斯虫属于梨形虫目（ Piroplasmida）巴贝斯科（ Babesiidae）巴贝斯属（ Babesia），是以蜱虫为中间宿主和传播媒介，在世界广泛流行。目前用于犬巴贝斯虫的诊断方法有临床诊断、血常规检查、尿液检查、血液涂片检查等。

目前诊断犬片状边虫与巴贝斯虫的最佳方式是分子诊断，尤其是利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）进行检测，这是一种更灵敏，且更具有专一性的技术。但目前的犬片状边虫与巴贝斯虫的PCR检测试剂盒存在以下技术缺陷：引物探针保守性较差，试剂盒检测的灵敏度较低；犬片状边虫与犬巴贝斯虫无法同时检测，费时费力。

发明内容

针对以上现有技术的缺陷，本发明提供用于检测犬片状边虫与巴贝斯虫的引物探针组合物、核酸检测试剂盒及其制备方法，并达到以下发明目的：提高引物探针保守性、检测灵敏度，可同时检测犬片状边虫与犬巴贝斯虫，方便快捷。

为实现以上发明目的，本发明采用以下技术方案：

分别设计犬片状边虫、巴贝斯虫与外参照的引物探针序列，共九条序列，如下所示：

用于检测犬片状边虫的上游引物：5’-gcctaccaaggcagtgatctat-3’，序列记为SEQID NO: 1。

用于检测犬片状边虫的下游引物：5’-cccattgtccaatattccccactg-3’，序列记为SEQ ID NO: 2。

用于检测犬片状边虫的荧光探针：5’-cagccacactggaactgagatacggtc-3’，序列记为SEQ ID NO: 3，其中探针5’端标记FAM荧光基团，3’端标记BHQ1淬灭基团。

用于检测犬巴贝斯虫的上游引物：5’-ccgtgctaattgtagggctaatac-3’，序列记为SEQ ID NO: 4。

用于检测犬巴贝斯虫的下游引物：5’-gctgccttccttagatgtggt-3’，序列记为SEQID NO: 5。