[发明专利]一种星型胶质细胞特异性METTL3过表达的重组腺相关病毒的应用有效
| 申请号： | 202210480033.5 | 申请日： | 2022-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN114796466B | 公开（公告）日： | 2023-10-24 |
| 发明（设计）人： | 蔡卫华;葛旭辉;刘蔚;凡进;唐鹏宇;蒋东冬;杨思亭 | 申请（专利权）人： | 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） |
| 主分类号： | A61K38/45 | 分类号： | A61K38/45;A61K48/00;A61P25/00;C12N7/01;C12N15/864;C12N15/54;C12N15/66 |
| 代理公司： | 南京业腾知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32321 | 代理人： | 周姗姗 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胶质 细胞 特异性 mettl3 表达 重组 相关 病毒 应用 | ||
1.星型胶质细胞特异性METTL3过表达的重组腺相关病毒在制备防治脊髓损伤的药物中的应用，所述METTL3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述星型胶质细胞特异性METTL3过表达的重组腺相关病毒的构建方法包括如下步骤：
(1)设计引物，PCR扩增获得METTL3基因的全长序列；
(2)将METTL3基因和pAAV-GfaABC1D载体分别用限制性内切酶BamH I和EcoR I进行双酶切，然后加入T4连接酶进行DNA连接反应，得到含有目的基因METTL3的重组穿梭质粒，对其进行扩增、提纯；
(3)将含有目的基因METTL3的重组穿梭质粒以及含腺相关病毒基因组DNA的pHelper和pAAV-RC质粒混合，共转染AAV-293细胞，培养后收获细胞，反复冻融后过滤，获得病毒液，纯化后，得到星型胶质细胞特异性METTL3过表达的重组腺相关病毒。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述引物的序列为：前引物：5’-GGGCGTCCTCGTGAGAATTA-3’，后引物：5’-GGGTAGGGGACACTATTGCG-3’。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述含有目的基因METTL3的重组穿梭质粒以及含腺相关病毒基因组DNA的pHelper和pAAV-RC质粒的摩尔比为1:1:1。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述纯化方法为：将病毒液离心后弃去大部分上清，加入核酸酶消化去除残留的质粒DNA，37℃孵育后离心，取上清加入到超滤管中，然后加入碘克沙醇梯度液超速离心，收集病毒层。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体包括稀释剂和赋形剂。
7.如权利要求1至6任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为针剂或冻干粉。
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