[发明专利]用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒及检测方法，属于常规水稻种子纯度检测技术领域。本发明用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒包括PCR mix和SSR引物；PCR mix所含成分为：3mM MgSO₄，100mM KCl，20mM pH 8.0Tris‑HCl，10mM EDTA，0.4mMdNTPs，0.04U/μL Taq DNA聚合酶，3％二甲基亚砜，12％甘油，0.02％溴酚蓝，0.02％二甲苯腈蓝FF；所述SSR引物序列如SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:40所示。采用本发明的试剂盒检测常规水稻种子纯度准确性高，节省人力和成本，提高了种子纯度鉴定的效率。

技术领域

本发明属于常规水稻种子纯度检测技术领域，具体涉及一种用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒及检测方法。

背景技术

在种子生产、加工过程中，由于串粉、机械混杂甚至人为掺假等原因，造成种子纯度降低、种子质量下降。我国对用于生产和销售的种子有强制性的质量要求，包含纯度、净度、发芽率、含水量四个方面。对常规稻种子而言，要求原种的种子纯度不得低于99.9％，大田用种种子纯度不得低于99.0％。目前，种子纯度鉴定的常用方法为DNA分子标记法，以SSR分子标记最为典型。SSR分子标记广泛分布于植物基因组中，且具有较高的多态性，稳定性强。通过SSR分子标记进行种子纯度鉴定不受植株生长阶段、时间、环境的影响，且鉴定结果十分准确。

SSR分子标记鉴定种子纯度时需要对待检对象进行DNA提取，一般而言，种子纯度检测时需要几十甚至上百个单株，利用传统的CTAB法逐一提取DNA过程繁琐、工作量大；在数个SSR位点上盲目的对所有待测单株进行检测工作量大，需要提前进行标记筛选；同一品种不同批次的种子中混杂种子并不一致，之前用于筛选假种子的标记在另一批种子中可能不适用，不像杂交稻可以固定几个标记用于种子纯度鉴定，常规稻需要重新筛选标记进行假种子筛选，因此多重PCR也不适用。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒及检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒，包括扩增水稻20个SSR标记的引物序列；

所述20个SSR标记如下：

第一个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组1号染色体8329860-8330052位置；

第二个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组2号染色体8760433-8760557位置；

第三个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组3号染色体36348164-36348246位置；

第四个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组4号染色体18996785-18996891位置；

第五个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组10号染色体9818621-9818784位置；

第六个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组12号染色体2433238-2433453位置；

第七个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组1号染色体6154019-6154166位置；

第八个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组2号染色体35141668-35141836位置；

第九个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组5号染色体36910796-26910946位置；

第十个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组7号染色体21872196-21872349位置；

第十一个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组8号染色体6763702-6763889位置；