[发明专利]用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒，其特征在于，包括扩增水稻20个SSR标记的引物序列；

所述20个SSR标记如下：

第一个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组1号染色体8329860-8330052位置；

第二个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组2号染色体8760433-8760557位置；

第三个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组3号染色体36348164-36348246位置；

第四个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组4号染色体18996785-18996891位置；

第五个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组10号染色体9818621-9818784位置；

第六个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组12号染色体2433238-2433453位置；

第七个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组1号染色体6154019-6154166位置；

第八个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组2号染色体35141668-35141836位置；

第九个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组5号染色体36910796-26910946位置；

第十个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组7号染色体21872196-21872349位置；

第十一个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组8号染色体6763702-6763889位置；

第十二个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组9号染色体7888400-7888602位置；

第十三个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组3号染色体9755616-9755778位置；

第十四个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组4号染色体21414515-21414681位置；

第十五个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组6号染色体5426496-5426630位置；

第十六个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组7号染色体2876165-2876333位置；

第十七个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组8号染色体17945061-17945202位置；

第十八个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组9号染色体19320299-19320450位置；

第十九个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组10号染色体18085499-18085630位置；

第二十个SSR标记位于水稻日本晴参考基因组11号染色体27673250-27673372位置。

2.根据权利要求1所述用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒，其特征在于，所述扩增水稻20个SSR标记的引物序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:40所示。

3.根据权利要求1所述用于检测常规水稻种子纯度的试剂盒，其特征在于，还包括用于扩增水稻20个SSR标记的反应体系溶液PCR mix。

4.权利要求1-3任一项所述的试剂盒在检测常规水稻种子纯度中的应用。

5.一种检测常规水稻种子纯度的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)从待测的常规水稻种子中，随机抽取一定数量的种子作为检测对象；提取待检测水稻种子样品的DNA，将所提样品的DNA编号，每5-10粒种子DNA为1组进行等量混样，获得多个DNA混池，分别以这些混池为模板，采用权利要求1-3任一项的试剂盒进行检测；

(2)筛选出步骤(1)中针对于某一或某些SSR标记初步检测有差异扩增的混池；对该混池中的所有的样品单独进行针对该差异SSR标记的检测；最终确定对该SSR标记有差异扩增的单株编号；

(3)判断“假种子”：如果一粒种子的DNA在2个及以上位点扩增出与品种标准材料或绝大多数种子存在差异的条带，则该种子非此品种的种子，为“假种子”；如果一粒种子的DNA在0个或1个位点扩增出与品种标准材料或绝大多数种子存在差异的条带，则该种子为此品种种子或疑似此品种种子；

(4)计算种子纯度：种子纯度为该品种种子或疑似该品种种子数与检测种子总数的百分比，根据上述(3)中的判断结果，计算待测常规水稻种子的纯度。