[发明专利]一种发酵液中γ-氨基丁酸的测定方法

说明书

本发明公开了一种发酵液中γ‑氨基丁酸的测定方法，包括以下步骤：将发酵液离心，得到第一次上清液；在所述第一次上清液中加入乙腈，离心得到第二次上清液；将第二次上清液通过高效液相三重四极杆串联质谱测定γ‑氨基丁酸。本发明利用高效液相三重四极杆串联质谱仪快速筛选产γ‑氨基丁酸菌株的方法，该方法中样品的前处理简单，特异性强，灵敏度高，检出限低，耗时短，节省了时间成本，利于大量样品的快速检测，提供了一种快速、操作简便的γ‑氨基丁酸测定方法。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种发酵液中γ-氨基丁酸的测定方法。

背景技术

γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid，GABA)，是分布于哺乳动物、植物和微生物中的非蛋白氨基酸，在生物体内由L-谷氨酸(L-Glu)或L-谷氨酸钠(L-MSG) 经过谷氨酸脱羧酶的作用，脱去一分子羧基而形成。GABA同样作为一种重要的抑制性神经递质，存在于脊椎动物中枢神经系统中，能够起到抑制作用。但年龄增长和精神压力的不断变大会影响人体内谷氨酸转化为GABA，并且当人体缺乏GABA时，会出现焦躁、失眠、疲劳等症状，而通过日常饮食摄入GABA 是补充该功效物质的一种有效方式。

乳酸菌(Lactic acid bacteria，LAB)是一种存在于人类体内的益生菌，广泛应用于食品行业。LAB作为一种食品安全级的微生物，具有谷氨酸脱羧酶 (glutamic aciddecarboxylase，GAD)活性，可以催化L-谷氨酸及其钠盐合成 GABA。因此，挖掘得到一株产GABA的乳酸菌菌株一直是乳酸菌领域的研究热点。

目前，产GABA乳酸菌菌株的筛选和检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法等，但这些方法都存在着缺陷，比如耗时长、灵敏度低、样品前处理方法繁琐等。因此，开发一种简单、快速筛选产GABA乳酸菌菌株的方法一直是GABA研究的重点，并将其开发应用到食品有待进一步研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种发酵液中γ-氨基丁酸的测定方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种发酵液中γ-氨基丁酸的测定方法，包括以下步骤：

(1)将发酵液离心，得到第一次上清液；

(2)在所述第一次上清液中加入乙腈，离心得到第二次上清液；

(3)将第二次上清液通过高效液相三重四极杆串联质谱测定γ-氨基丁酸。

本发明中样品前处理简单，通过利用高效液相三重四极杆串联质谱仪快速筛选产γ-氨基丁酸菌株，利于大量样品的检测。

作为优选，步骤(1)中，离心时间为5-10min，离心转速为8000-10000rpm。

作为优选，步骤(2)中，所述乙腈和上清液体积比例为1～3：1。

作为优选，步骤(2)中，所述离心温度为4℃，离心时间为10～20min，离心转速为10000～15000rpm。

作为优选，所述高效液相三重四极杆串联质谱测定的条件为：

ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(3.0×100mm，1.8μm)，进样量1μL，流动相A相：0.01％甲酸+2mM甲酸铵水溶液，B相：0.01％甲酸+2mM甲酸铵甲醇溶液；

采用以下梯度：

95％A：0.0-1.0min，95-10％A：1.0-4.0min，10％A：4.0-6.0min，10-95％A： 6.0-6.1min，95％A：6.1-8.0min。总运行时间为8min，流速为0.40mL/min。