[发明专利]水稻wx基因的检测引物、检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.水稻wx基因的检测引物，其特征在于，选自引物对(1)或引物对(2)中的任何一对，其中，所述引物对(1)由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的引物组成；所述引物对(2)由核苷酸序列为SEQ ID No.3所示的引物和核苷酸序列为SEQ ID No.4所示的引物组成。

2.一种水稻wx基因PCR检测试剂盒，包括：Taq酶、dNTP、Mg²⁺、去离子水和检测引物；其特征在于，所述的检测引物选自引物对(1)或引物对(2)中的任何一对，所述引物对(1)由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的引物组成；所述引物对(2)由核苷酸序列为SEQ ID No.3所示的引物和核苷酸序列为SEQ ID No.4所示的引物组成。

3.权利要求1所述的检测引物在判定水稻样品中是否存在wx基因或者wx基因的纯合体和杂合体中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括：

(1)提取待检测水稻样品的DNA；

(2)以提取的DNA为模板，以权利要求1所述的引物对(1)或引物对(2)为PCR扩增引物建立PCR扩增体系进行PCR扩增；

(3)利用引物(1)扩增，如果扩增结果只有140bp条带，则待检测的水稻样品为含有wx基因纯合体；如果扩增结果只有117bp条带，则待检测的水稻样品不含有wx基因；如果扩增结果同时含有140bp和117bp两条条带，则待检测的水稻样品为含有wx基因的杂合株；

利用引物对(2)扩增，如果扩增结果只有199bp条带，则待检测的水稻样品为含有wx基因纯合体；如果扩增结果只有176bp条带，则待检测的水稻样品不含有wx基因；如果扩增结果同时含有199bp和176bp两条带，则待检测的水稻样品为含有wx基因的杂合株。

5.权利要求1所述的检测引物在水稻wx基因辅助选育中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：

(1)用优良水稻品系与含有wx基因的糯稻材料杂交并回交，利用权利要求1所述的引物对(1)或引物对(2)扩增各杂交或回交世代单株wx基因位点，并对扩增的PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；

(2)利用引物(1)扩增，如果扩增结果含有140bp条带，则可判断样品中存在wx基因，利用引物(2)扩增，如果扩增结果含有199bp条带，则可判断样品中存在wx基因，辅助选育含有糯性基因且农艺性状优良的单株。

7.权利要求1所述的检测引物在判断水稻自交分离群体单株是否为wx基因纯合体中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括：

(1)提取待检测的自交分离群体单株的DNA；

(2)以提取的DNA为模板，以引物对(1)或引物对(2)为PCR扩增引物建立PCR扩增体系进行PCR扩增；

(3)利用引物对(1)扩增，如果扩增结果只有140bp条带，则检测样品单株为携带wx基因纯合单株，如果扩增结果同时含有140bp和117bp两条条带，则检测样品单株为携带wx基因的杂合株；利用引物对(2)wx-2扩增，如果扩增结果只有199bp条带，则检测样品单株为携带wx基因纯合单株，如果扩增结果同时含有199bp和176bp两条带，则检测样品单株为携带wx基因的杂合株。

9.权利要求1所述的检测引物在糯稻品种纯度鉴定中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，于，包括：

(1)提取待检测的糯稻品种的DNA；

(2)以提取的DNA为模板，以权利要求1所述的引物对(1)或引物对(2)为PCR扩增引物建立PCR扩增体系进行PCR扩增；

(3)利用引物对(1)扩增，如果电泳结果只有140bp条带的为携带纯合wx基因的糯稻单株，同时含有140bp和117bp两条条带的为携带杂合wx基因的糯稻单株，只含有117bp条带的为非糯稻单株混杂；

利用引物对(2)扩增，如果电泳结果只有199bp条带的为携带纯合wx基因的糯稻单株，含有199bp和176bp两条条带的单株为携带杂合wx基因的糯稻单株，只含有176bp条带的为非糯稻单株混杂；

(4)按以下公式计算水稻样品纯度：

式中：

P—样品纯度；

N_T—为供检种子粒数(幼苗数、株数)；

N_D—为判定为混杂株的种子粒数(幼苗数、株数)。