[发明专利]重组载体及其在构建糖尿病视网膜病变小鼠模型中的应用

权利要求书

1.一种重组载体，其特征在于，是将SEQ ID NO.1第9-492位所示DNA序列插入pAV-CMV-GFP-miRNA载体的AsisI和MluI位点之间获得的。

2.含有权利要求1所述重组载体的重组病毒。

3.权利要求2所述重组病毒的构建方法，其特征在于，是将包装质粒、辅助质粒和所述重组载体共转染至HEK-293T细胞，培养72h后收集病毒，得到所述重组病毒。

4.权利要求2所述重组病毒在构建糖尿病视网膜病变小鼠模型中的应用。

5.一种构建糖尿病视网膜病变小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

给小鼠注射浓度为10mg/ml的STZ溶液，注射后持续高脂高糖高胆固醇喂食，然后玻璃体腔注射权利要求2所述重组病毒，一个月后，再注射一次，第一次病毒注射两个月后得到所述糖尿病视网膜病变小鼠模型。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述小鼠为8周龄的雄性小鼠。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述STZ溶液的配制方法包括：将STZ溶于0.1mmol/L的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液中，并加入0.1mol/L的NaOH溶液调至pH为4.5，使STZ最终浓度为10mg/ml，然后用0.2um的微孔过滤器过滤除菌。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述小鼠注射STZ溶液的剂量为70-75mg/kg，连续注射3天。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述重组病毒的滴度为4.72×10¹²vg/ml。

10.根据权利要求9所述的构建方法，其特征在于，小鼠每只眼睛注射所述重组病毒的剂量为1-2μL。