[发明专利]一种以复制缺陷腺相关病毒为载体的新型冠状病毒疫苗

权利要求书

1.一种编码2019新型冠状病毒Spike蛋白受体结合域的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种含有权利要求1所述多核苷酸的载体。

3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体为顺式质粒载体。

4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述顺式质粒载为pAAVCAG-MCS。

5.一种能够表达权利要求1所述多核苷酸的复制缺陷型重组腺相关病毒。

6.根据权利要求5所述多核苷酸的复制缺陷型重组腺相关病毒，其特征在于，所述重组腺相关病毒为血清型6。

7.根据权利要求6所述多核苷酸的复制缺陷型重组腺相关病毒，其特征在于，对重组腺相关病毒衣壳进行改造以提高对抗原提呈细胞的转染效率。

8.根据权利要求7所述多核苷酸的复制缺陷型重组腺相关病毒，其特征在于，对重组腺相关病毒衣壳的改造是将663号位氨基酸残基由丝氨酸(S)突变为缬氨酸(V)，其衣壳氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

9.根据权利要求5-8任一所述的多核苷酸的复制缺陷型重组腺相关病毒的制剂，其特征在于，所述制剂为注射剂、滴鼻剂或喷雾剂。

10.根据权利要求9所述的多核苷酸的复制缺陷型重组腺相关病毒的制剂，其特征在于，所述注射剂为肌肉注射剂。

11.根据权利要求5-8任一所述的复制缺陷型重组腺相关病毒和/或权利要求9-10任一所述的复制缺陷型重组腺相关病毒的制剂在制备预防2019新型冠状病毒的疫苗中的应用。

12.一种权利要求5-8任一所述多核苷酸的复制缺陷型重组腺相关病毒的制备方法，所述方法包括以下步骤:(1)构建含有编码2019新型冠状病毒S蛋白RBD三聚体的多核苷酸的顺式质粒载体；(2)构建含有663位由丝氨酸突变为缬氨酸的衣壳质粒；(3)将步骤(1)和(2)所述质粒与辅助质粒一起转染入宿主细胞；(4)培养步骤(3)所述宿主细胞；(5)收获从步骤(4)所述细胞中释放的复制缺陷型重组腺相关病毒；(6)对步聚(5)中的培养产物进行纯化。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述顺式质粒载体为pAAVCAG-MCS。

14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述衣壳质粒载体为pAAV2/6或pDGM6。

15.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述辅助质粒为pAdDeltaF6或pHelper。

16.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述细胞为AAV293细胞。

17.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(6)所述纯化方法为AAVX亲和层析法。