[发明专利]一种CK-MB重组蛋白的表达载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种CK-MB重组蛋白的表达载体，其特征在于，所述表达载体上包括CK-M序列和CK-B序列，还包括第一标签序列和第二标签序列，所述第一标签序列位于所述CK-M序列之前或者之后，所述第二标签序列位于所述CK-B序列之前或者之后。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述第一标签序列和所述第二标签序列为选自包括His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签、Avi标签、SUMO标签、SNAP标签的组中的任意两种。

3.一种宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求1所述的表达载体。

4.一种CK-MB重组蛋白，其特征在于，其是通过诱导权利要求1所述的表达载体在宿主细胞中进行表达得到的。

5.权利要求1所述的表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，获得第一载体，所述第一载体具有至少一个多克隆位点，

S2，分别获得CK-M序列、CK-B序列、第一标签序列、第二标签序列；

S3，将所述分别获得CK-M序列、CK-B序列、第一标签序列、第二标签序列连接到所述第一载体上，即得到CK-MB重组蛋白的表达载体。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，将CK-M序列、CK-B序列、第一标签序列、第二标签序列逐一连接到所述第一载体上，或者先将相邻的两个序列连接在一起后再连接到所述第一载体上。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第一标签序列和/或所述第二标签序列为所述第一载体自带序列。

8.权利要求1所述的表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分别以具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的所述CK-MB重组蛋白的编码基因为模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的引物对进行PCR扩增得到CK-M序列，以SEQ IDNo.4和SEQ ID No.5所示的引物对进行PCR扩增得到CK-B序列。

(2)以pet-28a载体为模板，利用SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示的引物对进行PCR扩增得到Flag标签序列，利用Bgl IIEcoR I分别对所述Flag标签序列和所述pet-28a载体进行酶切，酶切产物连接后获得pet-Flag载体；

(3)利用BamH IHind III分别对所述CK-M序列和所述pet-Flag载体进行酶切，酶切产物连接后获得pet-Flag-CK-M载体；

(4)利用BamH IHind III分别对所述CK-B序列和所述pet-28a载体进行酶切，酶切产物连接后获得pet-28a-CK-B载体，以pet-28a-CK-B载体为模板，利用SEQ ID No.8和SEQ IDNo.9所示的引物对进行PCR扩增得到CK-B表达框；

(5)利用Hind IIIXho I分别对所述pet-Flag-CK-M载体和所述CK-B表达框进行酶切，酶切产物连接后获得pet-CK-MB载体，即为所述CK-MB重组蛋白的表达载体。

9.权利要求4所述的CK-MB重组蛋白在制备用于体外诊断的质量控制物中的应用。

10.蛋白保存液在保存权利要求4所述的CK-MB重组蛋白中的应用，其特征在于，所述蛋白保存液包括10～100mM Tris、0.05～0.2M NaCl、10～100mM甘氨酸、0..05～0.3M海藻糖或蔗糖、0.1～1％吐温80、0.005～0.05％P300，其中所述Tris的pH为7.5～8.5。