[发明专利]标志物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及标志物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用。本发明首次揭示了雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)调控不同亚型CD3+CD4+T细胞功能的分子机制，并且证实以mTOR通路关键效应分子磷酸化核糖体蛋白S6联合叉头框蛋白P3(Forkhead box P3，FOXP3)作为标志物，通过多维度分析技术，能够准确判断正常人和患者外周不同亚型CD3+CD4+T细胞的组成比例及其生物学功能变化情况，具有高灵敏度、高特异性的优势，并能够从病生理学机制出发评价疾病和药物对免疫细胞的影响，从而填补了目前已有的临床检验技术的不足，具有重大的技术创新性和临床应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及标志物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用。

背景技术

一直以来感染都是全人类健康的最严重威胁。机体免疫功能是抵抗各种外来病原菌入侵的最重要防线。在疾病状态下，患者可能出现免疫功能低下。同时，各种免疫干预治疗方案显著影响机体免疫力，从而导致条件性致病菌感染的风险明显增高。及时准确评估患者的免疫力水平对指导临床医生制定或调整治疗方案至关重要，尤其对于需要长期使用免疫抑制剂方案治疗的患者更是性命攸关的重大问题。长期以来，临床医生习惯于使用血常规、免疫球蛋白(IgG)水平等检验手段来判断患者的免疫力水平。虽然这些传统的生化检测项目能在一定程度上筛选出一部分存在明显免疫力低下的患者(如明显白细胞下降、低IgG血症等)，但是绝大多数患者在发生免疫功能受损早期甚至较长一段时间内都不会发生白细胞或IgG水平下降。这是因为免疫细胞在发生凋亡(一种程序性死亡过程)等病理性损伤前已经出现明显的细胞生物学活性异常。此时，虽然免疫细胞(白细胞等)的数量还在正常范围内，但其清除外来致病菌的保护功能已经显著受损，而血常规等检测结果并不能反映出机体免疫力低下的实际情况。因此，传统的生化检测手段早已无法满足现代临床医学的发展要求。

最新的免疫学研究成果揭示了人体免疫系统是一个由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成的复杂而精密的网络。外周免疫细胞由多种细胞群组成，根据细胞成分和功能不同可进一步分出多种不同类型。利用细胞表面标志物分类是目前免疫细胞最主要的鉴别方法之一。例如，通过细胞表面是否表达CD3、CD4、CD8等分子，可以从外周白细胞中分别检测出CD3+CD4+CD8-和CD3+CD4-CD8+两种不同亚型的T细胞。实现这一分选目标的里程碑技术就是流式细胞术，其原理是通过荧光标记的抗体与细胞表达的靶蛋白结合，通过计算机检测细胞所产生的荧光强度得出靶蛋白的表达水平。而根据靶蛋白在不同细胞中的表达水平不同，可将一大群细胞分为若干个特性相近(靶蛋白表达量相似)的细胞亚群。目前的流式细胞术已经能够进行多通道、多参数的快速定量分析，即可以同时从一个细胞中测得多个靶蛋白的表达情况，进而将一大类细胞细分为具有不同功能的多个亚群。随着技术水平的不断发展，流式细胞仪已经成为我国大多数市级医院检验科的常规仪器设备。目前，流式细胞仪的一个重要临床应用即通过分析不同免疫细胞亚群的比例变化评估患者的免疫力水平。例如，CD4+T细胞是细胞免疫中最关键的效应细胞，在抵抗条件性致病菌(病毒、结核、真菌等)感染发挥重要作用，临床医生通过流式细胞仪检测外周血CD4+T细胞数量或CD4/CD8比值变化可有效的评估患者免疫功能水平。该方法较传统生化检测具有更高的临床指导价值。近年来，随着多参数流式细胞术推广，临床医生可通过一次性检测外周免疫细胞的多个表面标志物和细胞因子，从而系统评价免疫细胞的数量、比例以及生物学功能，对患者疾病状态、感染风险以及药物疗效等做出系统性判断。