[发明专利]一种生产麦角甾醇的酿酒酵母工程菌株及其应用

权利要求书

1.一株产麦角甾醇的酿酒酵母工程菌，其特征在于，对出发菌株进行了如下至少一种改进：

(1)敲除酿酒酵母内源基因YPL062W、ROX1；

(2)敲除酿酒酵母内源基因NEM1；

(3)将基因ERG1、ERG2、ERG3、ERG4、ERG11、CTT1单拷贝整合到酿酒酵母的YJL064W、DOS2位点；

(4)将tHMG1、IDI基因在Ty12位点多拷贝整合；

(5)将POS5、ERG4、ERG2、ERG3在Ty3位点多拷贝整合。

2.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述基因YJL064W、DOS2被敲除后，在DOS2位点整合基因ERG2、ERG3、ERG4和CTT1，在YJL064W位点整合基因ERG1、ERG11和ERG4。

3.根据权利要求1或2所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述基因YPL062W的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示、所述ROX1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述基因NEM1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.根据权利要求1～3任一所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述基因ERG1、ERG2、ERG3、ERG4、ERG11、CTT1、YJL064W、DOS2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示。

5.根据权利要求1～4任一所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述基因tHMG1的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述基因IDI的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；所述基因POS5的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。

6.根据权利要求1～5任一所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，用启动子P_TDH1、P_GAL7、P_TDH3、P _GAL1、P_GAL10或P _PGK1起始基因的表达。

7.根据权利要求1～6任一所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，以酿酒酵母CENPK2-1D为出发菌株。

8.权利要求1～7任一所述的酿酒酵母工程菌在生产麦角甾醇中的应用。

9.一种产麦角甾醇的方法，其特征在于，将权利要求1～7任一所的述酿酒酵母工程菌接种于发酵培养基中，于28～30℃发酵72～100h。

10.权利要求1～7任一所述的酿酒酵母工程菌或权利要求9所述的方法在食品、医药、化工领域生产含麦角甾醇产品方面的应用。