[发明专利]DGAT1基因启动子区域变异位点及其在检测猪肉肌内脂肪含量上的应用

权利要求书

1.一种用于检测猪肌内脂肪含量的SNP分子标记，其特征在于：该SNP分子标记位于DGAT1基因启动子区的转录起始密码子上游379bp处，该位点碱基是C或T。

2.权利要求1所述的SNP分子标记在检测猪肉肌内脂肪含量中的应用，其特征在于：当所述SNP分子标记的基因型为TT型或CT型时，猪肉肌内脂肪含量高于CC型基因型。

3.一种用于检测权利要求1所述SNP分子标记的引物对，其特征在于：所述引物对的序列分别为：

DGAT1-3F：5’-CCACAACGCACTAGGCATTTC-3’

DGAT1-3R：5’-GGGCACCACTACCTCAGATCC-3’。

4.一种用于对权利要求1所述SNP分子标记的C/T突变位点进行基因分型的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求3所述的引物对。

5.权利要求3中所述的引物对，或权利要求4中所述的试剂盒在检测猪肉肌内脂肪含量中的应用，其特征在于：对所述SNP分子标记的C/T突变位点进行基因分型，基因型为TT或CT的猪肉样品的肌内脂肪含量高于基因型为CC的猪肉样品的肌内脂肪含量。

6.一种辅助选育猪高肌内脂肪性状遗传改良的方法，其特征在于：对权利要求1所述SNP分子标记的C/T突变位点进行基因分型，基因型为TT或CT的猪肉样品的肌内脂肪含量高于基因型为CC的猪肉样品的肌内脂肪含量。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

1)提取待检测猪肉样品的DNA；

2)采用权利要求3所述的引物对或权利要求4所述的试剂盒对步骤1)获得的DNA进行PCR扩增，获得扩增片段；

3)通过PCR-RFLP-PvuⅡ方法对扩增片段进行酶切分型，不同基因型的酶切产物会呈现不同的条带数：CC基因型为134bp和581bp两个条带，CT基因型为134bp、581bp和715bp三个条带，TT基因型为715bp一个条带；

4)当分型结果为TT型或CT型时，判断其猪肉样品的肌内脂肪含量高于CC型的猪肉样品肌内脂肪含量。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤2)中PCR扩增反应25μl体系：T3 mix22μl、上下游引物各1μl、待检测DNA 1μl；PCR反应程序：98℃，3min；98℃，10s；65℃，10s退火；72℃，10s；34个循环；72℃，3min。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述PCR-RFLP-PvuⅡ方法的反应体系为：待检测PCR扩增产物17μl、PvuⅡ酶1μl、Tango Buffer 2μl；反应条件为：37℃，1h。