[发明专利]一种羊胎盘多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种羊胎盘多肽及其制备方法和应用，属于蛋白质工程技术领域。它包括以下步骤：(1)羊胎盘的处理；(2)酶解法制备羊胎盘多肽；(3)羊胎盘酶解液的脱腥。试验表明，通过对胃蛋白酶与木瓜蛋白酶进行筛选确定最优的酶解工艺为：木瓜蛋白酶5‰，pH6.40，55℃酶解6小时，10000rpm离心20min。酿酒酵母发酵脱腥最佳条件：酵母液5％，28℃振荡培养箱培养24小时，不同提取条件下的酶解液均有不同程度的抗氧化活性。

技术领域

本发明属于蛋白质工程技术领域，具体地说，涉及一种改进的羊胎盘多肽。

背景技术

羊胎盘是母羊孕育胎儿时负责母体、胎儿血液和养分交换的组织，能够产生较多活性物质，其营养组成与人类胎盘接近。羊胎盘含有丰富的蛋白质、维生素、脂多糖、活性多肽、生长因子、多种氨基酸和微量元素等成分以及与免疫功能和维持机体正常运转相关的抗体等，能够被很好的吸收。据《本草纲目》记载，胎盘又称胞衣或紫河车，味甘、咸、温，入肺、肝、肾三经，有温中益气、养阴补血、美容养颜、防癌、抗衰老、调节内分泌、提高机体免疫力等多种功效，被广泛应用于医疗保健、食品、化妆品等领域。在瑞士羊胎盘提取液已经被添加运用到化妆品的生产中，同时，一些国内研究学者也将羊胎盘抗氧化肽应用到部分抗衰老的化妆品中。由于抗氧化肽具有良好的抗氧化活性、高稳定性、易吸收、安全营养等优点，成为近年来国内外研究的热点。

胎盘肽，又称为胎盘免疫活细胞素、胎盘免疫调节肽、胎盘转移因子、胎盘免疫调节因子，胎盘免疫调节肽是目前研究较深入的胎盘提取物，其成分和稳定性与提取时所采取的工艺有关。胎盘免疫调节肽属于小分子物质，是小分子量核苷酸以及肽类物质的混合物，分子量小于5000Da，含有多种氨基酸。周国华等报道，胎盘肽为无色或微黄透明液体，含有多种氨基酸，具有可透性，可超滤性，蛋白质反应阴性，无抗原性等多种特性，冻干品通常为白色疏松状粉末，且极易溶于水。

酶解法是目前大规模制备生物活性肽的常用方法，通过加入蛋白酶来达到对蛋白质进行适度的水解。酶解法的原理是利用蛋白酶的专一性、高效性、选择性等特点。酶解过程一般都是在相对比较温和的环境中进行，酶解过程虽难以控制，但酶解法也因安全性高、条件温和、成本较低等优势而受到广泛重视。

本文以羊胎盘为原料，采用酶解法制备羊胎盘多肽，对其进行蛋白质含量测定、脱腥处理，同时比较不同条件提取羊胎盘肽的抗氧化活性。

发明内容

1、要解决的问题

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种羊胎盘多肽的制备方法和应用，具体来说：发明目的：比较两种不同蛋白酶提取羊胎盘多肽的得率，同时筛选出最优工艺，并对不同条件下的提取物进行脱腥处理、蛋白质含量测定、抗氧化活性比较；发明方法：采用蛋白酶酶解羊胎盘，酿酒酵母对酶解液进行脱腥处理，通过随机寻找34人对脱腥后的酶解液进行评比打分，然后超滤得到不同分子量的酶解液，用凯氏定氮仪测定蛋白质含量，最后用抗氧化活性测定试剂盒进行测定活性；结论：通过对胃蛋白酶与木瓜蛋白酶进行筛选确定最优的酶解工艺为：木瓜蛋白酶5‰，pH 6.40，55℃酶解6小时，10000rpm离心20min。酿酒酵母发酵脱腥最佳条件：酵母液5％，28℃振荡培养箱培养24小时，不同提取条件下的酶解液均有不同程度的抗氧化活性。

2、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种羊胎盘多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)羊胎盘的处理

羊胎盘室温解冻，清水冲洗后用75％的乙醇浸泡30min，剪碎，沥干水分，称重后倒入破壁机中，加入生理盐水进行捣碎得到羊胎盘匀浆；

(2)酶解法制备羊胎盘多肽