[发明专利]微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组、探针及应用在审
| 申请号： | 202210313315.6 | 申请日： | 2022-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN114622038A | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 谢芝勋;张艳芳;曾婷婷;张民秀;谢丽基;罗思思;黄娇玲;王盛;邓显文;谢志勤;刘加波 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12N15/11;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京卓岚智财知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11624 | 代理人： | 魏伟 |
| 地址： | 530001 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微滴式 数字 pcr 检测 圆环 病毒 引物 探针 应用 | ||
1.微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针，其特征在于：所述引物组和探针的核苷酸序列如下所示：
上游引物AGV2-F：5’GACGATGGAGGAGTCACTGGTT 3’(SEQ ID NO：1)；
下游引物AGV2-R：5’GTCCGTCTGGGTYTCCTGTGT 3’(SEQ ID NO：2)；
探针AGV2-P：5’FAM-CAGGAGGCTAGTGGACT-BHQ1 3’(SEQ ID NO：3)。
2.根据权利要求1所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针，其特征在于：所述上游引物AGV2-F、下游引物AGV2-R和探针AGV2-P的摩尔比为9:9:5。
3.根据权利要求1所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：退火温度为54.0℃。
4.微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：总的扩增体系为20μL：dd PCRTMSupermix for Probe 10μL，设置6个不同引物探针组合，浓度为600、600、900、900、1200、1200nmol/L上下游引物各1μL，对应浓度梯度为150、300、250、500、350、600nmol/L的探针1μL，模板2μL，最后用ddH2O补足20μL反应体系。
5.根据权利要求4所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：dd PCR反应程序为：95℃预变性10min；94℃30s，退火温度60.0～50.0℃，40个循环，98℃固化10min，4℃结束反应，升降温度设置2.0℃/s。
6.根据权利要求5所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：Real-time PCR反应体系为20μL：Probe qPCR Mix，with UNG 10μL，上下游引物各0.4μL，浓度为900nmol/L，探针0.8μL，浓度为900nmol/L，ROX ReferenceDye 0.4μL，模板2μL，ddH2O 6μL。
7.根据权利要求6所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：反应程序：95℃预变性30s；95℃5s，退火温度60℃34s，40个循环；4℃结束反应。
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