[发明专利]一种检测T7 RNA聚合酶活性的试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 202210294661.4 | 申请日： | 2022-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN114574547A | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 宋东亮;阳瑜红;刘想;焦亮 | 申请（专利权）人： | 武汉翌圣生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 赵颖 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东湖新技术开发区高*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 t7 rna 聚合 活性 试剂盒 方法 | ||
1.一种检测T7 RNA聚合酶活性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核苷三磷酸和含有T7启动子的双链DNA。
2.根据权利要求1所述的检测T7 RNA聚合酶活性的试剂盒，其特征在于，所述核苷三磷酸包括三磷酸腺苷、三磷酸鸟苷、三磷酸胞苷和三磷酸尿苷；
优选地，所述含有T7启动子的双链DNA的核酸序列包括SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列；
优选地，所述试剂盒还包括T7 RNA聚合酶标准品。
3.权利要求1或2所述的检测T7 RNA聚合酶活性的试剂盒在检测T7 RNA聚合酶活性中的应用。
4.一种T7 RNA聚合酶活性的检测方法，其特征在于，所述方法包括：将待测T7 RNA聚合酶与权利要求1或2所述的检测T7 RNA聚合酶活性的试剂盒中的核苷三磷酸和含有T7启动子的双链DNA混合，进行转录反应，检测反应产物中焦磷酸的含量，将所述焦磷酸的含量带入由T7 RNA聚合酶标准品建立的标准曲线中，得到所述待测T7 RNA聚合酶的活性。
5.根据权利要求4所述的T7 RNA聚合酶活性的检测方法，其特征在于，所述标准曲线的建立方法包括：
将T7 RNA聚合酶标准品进行梯度稀释，获得梯度酶活性的T7 RNA聚合酶标准品，分别利用所述梯度酶活性的T7 RNA聚合酶标准品与权利要求1或2所述的检测T7 RNA聚合酶活性的试剂盒中的核苷三磷酸和含有T7启动子的双链DNA混合，进行转录反应，检测反应产物中焦磷酸的含量，获取每一个酶活性的T7 RNA聚合酶标准品对应的焦磷酸的含量，根据所述焦磷酸的含量与酶活性的对应关系建立所述标准曲线。
6.根据权利要求4或5所述的T7 RNA聚合酶活性的检测方法，其特征在于，所述转录反应的时间为30～60min，温度为30～40℃。
7.根据权利要求4-6任一项所述的T7 RNA聚合酶活性的检测方法，其特征在于，所述转录反应后还包括终止反应的步骤。
8.根据权利要求7所述的T7 RNA聚合酶活性的检测方法，其特征在于，所述终止反应的时间为5～15min，温度为60～70℃。
9.根据权利要求4-8任一项所述的T7 RNA聚合酶活性的检测方法，其特征在于，所述焦磷酸的含量的检测方法包括荧光法。
10.根据权利要求4-9任一项所述的T7 RNA聚合酶活性的检测方法，其特征在于，所述方法包括：
将T7 RNA聚合酶标准品进行梯度稀释，获得梯度酶活性的T7 RNA聚合酶标准品，分别利用所述梯度酶活性的T7 RNA聚合酶标准品与权利要求1或2所述的检测T7 RNA聚合酶活性的试剂盒中的核苷三磷酸和含有T7启动子的双链DNA混合，于30～40℃进行转录反应30～60min，并于60～70℃终止反应5～15min，通过荧光法检测反应产物中焦磷酸的含量，获取每一个酶活性的T7RNA聚合酶标准品对应的焦磷酸的含量，根据所述焦磷酸的含量与酶活性的对应关系建立所述标准曲线；
将待测T7 RNA聚合酶与所述核苷三磷酸和含有T7启动子的双链DNA混合，于30～40℃进行聚合反应30～60min，并于60～70℃终止反应5～15min，通过荧光法检测反应产物中焦磷酸的含量，将所述焦磷酸的含量带入所述标准曲线中，得到所述待测T7 RNA聚合酶的活性。
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