[发明专利]一种农业用水中食源性致病微生物的富集方法及应用

权利要求书

1.一种农业用水中食源性致病微生物的富集方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将预处理的农业用水经滤膜抽滤，得到截留有微生物的滤膜和滤膜滤液；

2)将步骤1)中所述截留有微生物的滤膜进行洗脱，所得洗脱液经固液分离，所得固相为膜细菌组分，所得液相为膜病毒组分；

3)将步骤1)中所述滤膜滤液经切向流过滤器处理，获得切向流过滤的病毒组分；

步骤2)和步骤3)之间没有时间顺序的限制。

2.根据权利要求1所述富集方法，其特征在于，步骤1)中滤膜的孔径包括0.2～0.8μm。

3.根据权利要求2所述富集方法，其特征在于，步骤1)中滤膜过滤包括依次采用大孔径滤膜、小孔径滤膜过滤；

所述大孔径滤膜为孔径0.45～0.8μm的滤膜；

所述小孔径滤膜包括0.2μm的滤膜。

4.根据权利要求1所述富集方法，其特征在于，步骤2)中所述洗脱用溶液为第一洗脱缓冲液；

所述第一洗脱缓冲液包括以下浓度的组分：牛肉粉10～15g/L、Tris-Base0.1～0.2mol/L、甘氨酸0.05～0.1mol/L；

步骤2)中所述分离为离心法，所述离心的转速为3000～6000×g，所述离心的时间为5～10min。

5.根据权利要求1所述富集方法，其特征在于，步骤3)中切向流过滤器处理依次包括切向流过滤器浓缩和洗脱。

6.根据权利要求5所述富集方法，其特征在于，所述洗脱用溶液为第二洗脱缓冲液；所述第二洗脱缓冲液包括以下浓度的组分：牛肉粉20～30g/L、Tris-Base 0.2～0.4mol/L、甘氨酸0.1～0.2mol/L。

7.根据权利要求1～6任意一项所述富集方法，其特征在于，还包括步骤2)中含膜病毒组分的溶液和/或步骤3)中所述切向流过滤的病毒组分进行病毒沉淀，得到食源性病毒或冠状病毒；

所述病毒沉淀的方法依次包括PEG沉淀试剂处理和固液分离。

8.根据权利要求7所述富集方法，其特征在于，所述PEG沉淀试剂包括以下浓度的水溶液：PEG-80008～200g/L、氯化钠17.5～37.4g/L；

所述PEG沉淀试剂的处理时间为1～12h；

所述PEG沉淀试剂的处理温度为3～5℃。

所述固液分离包括离心；所述离心的转速为4500～8000rpm，所述离心的时间为30～120min。

9.根据权利要求7所述富集方法，其特征在于，所述致病细菌包括以下细菌中的一种或几种：单增李斯特、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌；

所述食源性病毒包括以下病毒中的一种或几种：诺如病毒、甲型肝炎病毒和轮状病毒；

所述冠状病毒包括猪流行性腹泻病毒。

10.权利要求1～9任意一项所述富集方法联合实时荧光定量PCR检测技术或高通量测序技术在快速检测农业用水中食源性致病微生物中的应用。