[发明专利]牛STR复合扩增检测试剂盒、引物组合物及其应用

说明书

本发明公开了牛STR复合扩增检测试剂盒、引物组合物及其应用。具体地公开了同时扩增牛14个STR位点的引物组合物，所述14个STR位点分别为TGLA227、BM2113、ETH10、SPS115、ILSTS006、TGLA126、TGLA122、INRA023、BM1818、ETH225、BM1824、CSRM60、HAUT27和CSSM66，所述引物组合物由核苷酸序列分别如SEQ ID No.1‑28所示的引物组成。本发明用于牛个体识别与亲权鉴定的引物组合物、试剂盒及检测方法灵敏度高、稳定性好，可实现样本直接扩增，使用方法简单，符合牛DNA相关案件检验及DNA数据库建设要求。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及法庭科学DNA检验技术领域，具体涉及牛STR复 合扩增检测试剂盒、引物组合物及其应用。

背景技术

俗称的“牛”是偶蹄目、牛科、牛亚科下的一族动物，共有5属，包括非洲水牛 和美洲野牛、黄牛、水牛和牦牛。其中黄牛是中国固有的普通牛种，其在中国的饲养 头数在大家畜中或牛类中均居首位，饲养地区几乎遍布全国，在农区主要作役用，半 农半牧区役乳兼用，牧区则乳肉兼用，是一种对我国农牧民非常重要的家畜。

短串联重复(Short tandem repeats，STR)，又称微卫星DNA(MicrosatelliteDNA) 或简单重复序列(Simple repeat sequence，SRS或SSR)，是广泛存在于原核生物和真核生物基因组中的核苷酸重复序列。有丝分裂过程中DNA链之间的错配引起的复制 滑动被认为是导致STR产生的较为常见原因，并且依据不同复制单元大小的不同以及 不同物种之间，复制滑动发生的概率也不相同。STR是以核心序列(core repeat units) 首尾相连多次重复形成。每个STR的核心序列结构相同，长度为2-6bp，但其重复单 位数目和重复区域的长度不同，因此STR在不同人群之间的分布具有差异性，构成了 STR遗传多态性。不同个体之间在一个同源STR位点的重复次数也不同，因而同指纹 识别一样，STR位点分析也可对个体进行身份识别。通过识别个体基因组在特定位点 的特定序列重复，即可创建其基因档案。基于此，STR分析法已经成为一种重要的鉴 定分析方法，应用于法医学、亲子鉴定及细胞鉴定等领域。

目前，进行牛个体识别和亲缘关系鉴定主流采用的商品化试剂盒是美国ABI公司的StockMarks牛基因分型试剂盒，该试剂盒是采用国际动物遗传学会(ISAG)推荐的 微卫星标记进行牛亲缘关系鉴定和基因分型的，包括以下11个位点：TGLA227、BM2113、 TGLA53、ETH10、SPS115、TGLA126、TGLA122、INRA023、ETH3、ETH225、BM1824，采 用四色荧光标记。此外，还有美国ThermoFisher公司的Bovine Genotypes Panel 3.1 Kit，可实现单管18个STR位点的复合扩增，其中包括国际动物遗传学会(ISAG)推 荐的12个位点：TGLA227、BM2113、TGLA53、ETH10、SPS115、TGLA126、TGLA122、INRA023、 ETH3、ETH225、BM1824、BM1818，以及联合国粮农组织(FAO)推荐的6个位点:SPS113、 RM067、CSRM60、MGTG4B、CSSM66、ILSTS006，采用五色荧光标记。该产品价格昂贵， 且技术垄断，此外还存在位点少、检测速度慢、无法实现直接扩增、识别率低等一系 列问题。

针对上述现状，迫切需要开展用于牛个体识别和亲权鉴定的检验试剂研究开发工作，即在对现有牛STR技术进行深入研究的基础上，针国内分布较为广泛的黄牛进行 DNA检验试剂的研究和开发。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何准确、方便地解决牛个体识别的问题，和/或，牛亲缘关系鉴定的问题。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术 人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。