[发明专利]一种IPTG诱导性缺失D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种IPTG诱导性缺失D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株及其应用。本发明首先发现了非洲猪瘟病毒D1133L蛋白能够抑制IFN‑β及其下游因子ISG‑15、ISG‑56细胞因子的产生，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂应用。另外构建了IPTG诱导性缺失D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株，具体是将大肠杆菌lac操纵基因‑阻遏物系统将筛选表达盒插入到ASFV的非结构蛋白D1133L之前得到重组病毒。在存在IPTG的情况下，此重组病毒与野生型具有相似特征，无IPTG存在时，D1133L蛋白的表达会被抑制。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及IPTG诱导性敲除D1133L基因的非洲猪瘟病毒减毒株及其应用。

背景技术

非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swinefever virus, ASFV）感染引起的一种家猪和野猪烈性传染病，该病发病过程短，病死率接近100%，被世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告的动物疫病，我国也将其列为一类动物疫病。

非洲猪瘟病毒重组毒株以及相关疫苗的研制是应对非洲猪瘟的重要手段之一。

截止目前很多病毒的结构蛋白和一些非结构蛋白无法通过基因编辑技术直接敲除，导致无法明确该病毒蛋白在病毒复制过程中发挥的作用及装配机制。ASFV编码的D1133L基因属于非结构蛋白，与牛痘病毒的D6R具有相似的解旋酶基序，属于解旋酶，并且预测在病毒复制过程中发挥作用，D1133L属于晚期表达基因。

Lac操纵子中编码的酶在阻遏物——乳糖操纵子阻遏蛋白（lacrepressorlacI）负调控下，可以特异性的与乳糖操纵基因（lacoperatorLacO）结合并以高亲和力与其21bp序列结合，阻遏酶的表达。乳糖操纵子阻遏蛋白（lacrepressorlacI）也可以与异乳糖或异丙基硫代半乳糖苷（inducer isopropyl b-D-thiogalactoside,IPTG）结合，从而降低阻遏物对操纵子的亲和力，通过这种方式，IPTG可以减少Lac操纵子转录的抑制，从而诱导表达，该系统可以很好地调节哺乳动物细胞中转染和整合基因的表达，同时也在应用在病毒领域，比如在Vaccinia Virus（VACV）病毒中已使用该系统可以用来研究病毒形态发生（MENG X,EMBRY A, ROSE L, et al. Vaccinia virus A6 is essential for virion membranebiogenesis and localization of virion membrane proteins to sites of virionassembly [J]. J Virol, 2012, 86(10): 5603-5613.），成为转录调控病毒蛋白与宿主互作的有力工具。

发明内容

本发明首先发现了非洲猪瘟病毒D1133L蛋白能够抑制IFN-β及下游细胞因子ISG-15、ISG-56的mRNA表达，具有免疫抑制作用。其次，为了降低非洲猪瘟病毒的免疫抑制活性，本发明利用IPTG诱导表达系统构建了敲除D1133L基因的ASFV重组病毒。

具体的，本发明提供了非洲猪瘟病毒D1133L蛋白在制备抑制IFN-β及下游抗病毒细胞因子ISG15、SG56表达的药物中的应用。