[发明专利]m6A甲基转移酶WTAP在制备用于诊断直肠癌新辅助放疗抵抗标记物中的用途

说明书

本发明提供了m6A甲基转移酶WTAP在制备用于诊断直肠癌新辅助放疗抵抗标记物中的用途。本发明还提供了检测m6A甲基转移酶WTAP的试剂在制备诊断直肠癌新辅助放疗抵抗试剂盒中的用途。本发明还提供了m6A甲基转移酶WTAP作为标记物在制备诊断直肠癌新辅助放疗抵抗试剂盒中的用途。本发明发现m6A甲基转移酶WTAP在直肠癌组织中高表达，且与直肠癌放疗抵抗呈正相关，患者总生存时间缩短，提示预后不良。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种生物标记物，特别来说是m6A甲基转移酶WTAP在制备用于诊断直肠癌新辅助放疗抵抗标记物中的用途。

背景技术

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是全球第三大常见恶性肿瘤，也是癌症死亡的第二大原因。据世界卫生组织国际癌症研究机构最新公布的数据，2020年中国CRC新发病例55.5477万例，占全部恶性肿瘤发病的12.2%；由CRC导致的死亡病例28.6162万例，占全部恶性肿瘤死亡的9.5%。近年来直肠癌多学科综合治疗尤其是术前新辅助放化疗（neoadjuvant chemoradiotherapy, nCRT），因同时兼顾放疗对局部癌灶的控制，以及化疗对全身微小转移灶的杀伤，展现出一定的临床优势。然而，不同患者对nCRT的反应千差万别。约占70%患者因对放疗不敏感无法从中获益，导致肿瘤进展、延误手术时机。因此，如何精准预测直肠癌放疗敏感性，已成为肿瘤研究领域的热点和难点。

肾母细胞瘤1-结合蛋白（Wilms Tumor 1-Associating Protein, WTAP）是m6A甲基化修饰的重要甲基转移酶，且作为剪接调节因子发挥重要作用。WTAP是与肾母细胞瘤1抑癌基因（WT1）密切相关的核蛋白，有文献报道WTAP与剪接因子共定位于整个核质和核斑点，并受放线菌素D影响。

发明内容

针对现有技术中的上述问题，本发明提供了m6A甲基转移酶WTAP在制备用于诊断直肠癌新辅助放疗抵抗标记物中的用途，所述的这种用途要解决现有技术无法预测直肠癌放疗敏感性的技术问题。

本发明提供了m6A甲基转移酶WTAP在制备用于诊断直肠癌新辅助放疗抵抗标记物中的用途。

本发明还提供了检测m6A甲基转移酶WTAP的试剂在制备诊断直肠癌新辅助放疗抵抗试剂盒中的用途。

本发明还提供了m6A甲基转移酶WTAP作为标记物在制备诊断直肠癌新辅助放疗抵抗试剂盒中的用途。

已知m6A甲基化修饰水平失调几乎参与了肿瘤发生发展的各个方面，包括细胞周期、细胞凋亡、侵袭转移、细胞自噬、放化疗敏感性、肿瘤微环境等。申请人利用前期收集的30例直肠癌患者放疗前活检组织样本，参照术后病理AJCC版肿瘤退缩分级（TumorRegression Grade, TRG）将其分成两组，TRG=（0+1）为放疗敏感组，TRG=（2+3）为放疗抵抗组，分别检测RNA甲基化含量，结果显示：放疗抵抗组m6A甲基化修饰水平显著高于放疗敏感组。

本发明研究还发现，m6A甲基化修饰水平升高主要是由甲基转移酶参与调控。通过METTL3、METTL14、WTAP等组成的核心蛋白复合体，催化mRNA上的碱基发生甲基化修饰。其中，METTL3是具有催化活性的亚基，METTL14负责识别底物，WTAP主要负责协助两者靶向定位于核斑点。我们选取GSE80606数据集利用R语言分析RNA-seq数据，结合组织样本定量检测，筛选目标m6A甲基化修饰调控因子。结果显示：甲基转移酶WTAP在mRNA水平表达上调，且与直肠癌放疗抵抗呈正相关。

我们选取200例直肠癌患者组织芯片和8例活检样本石蜡白片，分别检测WTAP蛋白表达水平。结果显示：WTAP在癌组织中高表达，且与直肠癌放疗抵抗呈正相关，患者总生存时间缩短，提示预后不良。