[发明专利]与西瓜全缘叶形基因ClLL紧密连锁的分子标记及应用

权利要求书

1.与西瓜全缘叶形基因ClLL紧密连锁的分子标记引物，其特征在于，其中，分子标记命名为dCAPS2和dCAPS3，扩增dCAPS2分子标记的引物对的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；扩增dCAPS3分子标记的引物对的上游引物序列如SEQID NO.3所示，下游引物序列如SEQ ID NO.4所示。

2.权利要求1所述与西瓜全缘叶形基因ClLL紧密连锁的分子标记引物在西瓜全缘叶形性状分子育种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述分子标记引物用于鉴定或辅助鉴定西瓜全缘叶形性状。

4.一种鉴定西瓜全缘叶形性状的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）提取西瓜植株组织的DNA；

（2）PCR扩增：利用权利要求1中所述的引物对，对步骤（1）所提取样品进行PCR扩增；

（3）对步骤（2）中的扩增产物进行酶切处理，之后进行电泳检测；

（4）根据步骤（3）的电泳条带结果进行判定，具体标准为：

对于分子标记dCAPS2，如果酶切产物为长度122bp的特征条带，则待测西瓜植株为全缘叶形的西瓜材料，如果酶切扩增产物为146bp的特征条带，该待测西瓜植株为纯合裂刻叶形的西瓜材料，如果酶切产物为两条长度分别为146bp、122bp的特征条带，该待测西瓜植株为杂合裂刻叶形的西瓜材料；

对于分子标记dCAPS3，如果酶切产物为长度119bp的特征条带，则待测西瓜植株为全缘叶形的西瓜材料，如果酶切扩增产物为89bp的特征条带，该待测西瓜植株为纯合裂刻叶形的西瓜材料，如果酶切产物为两条长度分别为119bp、89bp的特征条带，该待测西瓜植株为杂合裂刻叶形的西瓜材料。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述PCR扩增的反应体系为：DNA 1μL、2×PCR Mix 5μL、上游引物0.5μL、下游引物0.5μL、灭菌蒸馏水3μL，总体积10μL；PCR扩增条件为：95℃、5min；94℃、30s, 57℃、30s, 72℃、50s, 共35个循环；72℃、10min；4℃保存；步骤（3）中所述的酶切反应体系为： PCR产物5μL，10 X buffer1.5μL，Dde1限制性内切酶0.5μL，灭菌蒸馏水3.5μL，总体积10μL；酶切条件为37℃、4h。

6.一种用于鉴定西瓜全缘叶形性状的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1中所述的引物对。

7.用于检测dCAPS标记是否存在的试剂在全缘叶形基因ClLL定位中的应用，其特征在于，扩增dCAPS2标记的引物对的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ IDNO.2所示；扩增dCAPS3标记的引物对的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物序列如SEQ ID NO.4所示。