[发明专利]一种苯醚甲环唑半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种苯醚甲环唑半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用，本发明制备得到了两种半抗原，半抗原B‑PH和半抗原B‑SG，应用半抗原B‑PH偶联载体蛋白BSA得到人工抗原B‑PH‑BSA，并进一步制备得到用于检测苯醚甲环唑的特异性抗体，以人工抗原B‑SG‑OVA作为包被原；该抗体对苯醚甲环唑具有良好的灵敏度和特异性，半抑制浓度为1.75ng/mL，最低检测限为0.022ng/mL，定量检测范围为0.11～27.57ng/mL，对苯醚甲环唑类似物无交叉反应，可特异性检测苯醚甲环唑；本发明提供了更优的苯醚甲环唑的免疫检测原料，为苯醚甲环唑的快速准确检测提供了更优选择。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种苯醚甲环唑半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。

背景技术

苯醚甲环唑(difenoconazole)是一种毒性低，化学性质稳定，持效期长的广谱三唑类杀菌剂，属于14α-甾醇脱甲基化抑制剂，可以干扰菌丝生长，抑制病原体孢子萌发，最终抑制真菌生长。其广泛用于防治水稻、葡萄、梨、香蕉、甜菜等多种作物上的叶枯病、炭疽病、叶斑病、白粉病、黑星病等病害。但大量施用苯醚甲环唑会造成农药残留，残留的苯醚甲环唑会进入生态系统，对生态环境、动物和人类健康产生不利影响。按照我国农药的毒性分级标准，苯醚甲环唑的毒性经口大于500mg/kg，对人的每日容许摄入量为0.01mg/kg体重。

苯醚甲环唑常规检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法等仪器方法，然而，这些方法虽然具有检测效率高、准确度高、抗干扰能力强等特点；但是，检测所需的仪器设备昂贵、成本高、样品前处理繁杂、需专业人士操作，不符合大批量样品现场检测要求。

基于抗原-抗体特异性分子识别的免疫检测方法，在现场检测方面具有更大优势，表现出快速、灵敏、简便等特点，并且成本低廉，对操作人员技能要求较低。现有技术公开了一些用于苯醚甲环唑检测的半抗原、抗原、抗体等，但是存在着苯醚甲环唑半抗原合成步骤多、反应副产物多、抗体检测限相对较高等问题(冯久慧.苯醚甲环唑免疫检测方法的研究[D].天津科技大学,2016.)。

免疫分析方法的关键在于设计出合适的半抗原，从而制备出灵敏度高、特异性强的抗体，因此，有必要研究出全新的苯醚甲环唑半抗原，简化了半抗原的合成步骤，降低抗体的检测限，提高苯醚甲环唑抗体的特异性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术中苯醚甲环唑免疫检测半抗原、抗体存在的缺陷和不足，提供一种苯醚甲环唑半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。

本发明的目的在于提供苯醚甲环唑半抗原。

本发明的目的还在于提供所述苯醚甲环唑半抗原在制备苯醚甲环唑人工抗原中的应用。

本发明的目的还在于提供苯醚甲环唑人工抗原。

本发明的目的还在于提供所述苯醚甲环唑人工抗原在制备苯醚甲环唑抗体中的应用。

本发明的目的还在于提供一种苯醚甲环唑多克隆抗体。

本发明的目的还在于提供一种苯醚甲环唑的检测方法。

本发明的目的还在于提供一种检测苯醚甲环唑的试剂盒。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种苯醚甲环唑半抗原，为半抗原B-PH或半抗原B-SG，所述半抗原B-PH的结构式如式(I)所示，

所述半抗原B-PH采用系统命名法命名为：4-((2-(2-氯-4-(4-氯苯氧基)苯基)-4-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)甲氧基)苯甲酸，即4-((2-(2-chloro-4-(4-chlorophenoxy)phenyl)-4-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)methoxy)benzoic acid；