[发明专利]一种无核酸扩增可视化的RNA定量检测方法

权利要求书

1.一种无核酸扩增可视化的RNA定量检测方法，所述RNA定量检测方法用于非疾病诊断治疗方法，其特征在于，所述RNA定量检测方法包括：

S1：设计制备CRISPR-Cas13系统响应的RNA交联DNA水凝胶；

S2：将S1制备的DNA水凝胶固定在毛细管末端形成DNA水凝胶薄膜，由DNA水凝胶薄膜与毛细管共同组成自驱动DNA水凝胶传感器；

S3：设计合成靶标RNA特异性的crRNA；

S4：将crRNA、Cas13蛋白和已知浓度靶标RNA在缓冲溶液中共同孵育后，获得含有已知浓度的靶标RNA分子样品溶液；

S5：将自驱动DNA水凝胶传感器水平浸入含有已知浓度的靶标RNA分子样品溶液；

S6：通过S5中溶液在毛细管中的移动距离，构建靶标RNA分子浓度与移动距离之间的线性对应关系；

S7：将crRNA、Cas13蛋白和未知浓度靶标RNA在缓冲溶液中共同孵育后，获得未知浓度的含有靶标RNA分子的待测样品溶液，将自驱动DNA水凝胶传感器水平浸入含有靶标RNA分子的待测样品溶液，根据S6中线性对应关系对待测样品中靶标RNA分子进行可视化检测及定量分析；

所述S1具体包括：

S11：设计合成两条acrydite修饰的DNA链，A-DNA-X和A-DNA-Y；

S12：设计合成双重功能的交联单链RNA，DRCL-ssRNA；

S13：将A-DNA-X和A-DNA-Y分别与丙烯酰胺单体共聚，分别形成两条直链聚丙烯酰胺-DNA，PA-X和PA-Y；

S14：DRCL-ssRNA包含三个序列区域，其中，3'-和5'-末端的两个序列分别与DNA-X和DNA-Y互补配对，在室温下形成具有三维多孔结构的DNA水凝胶；

所述S14中DNA水凝胶的中间序列为CRISPR-Cas13系统响应序列，即CRISPR-Cas13系统反式切割反应的底物序列；

所述S6中毛细管中的移动距离具体为：靶标RNA分子激活CRISPR/Cas13系统的附属酶切活性，使毛细管末端的DNA水凝胶薄膜的通透性增加，靶标RNA分子的浓度越大，溶液在毛细管中移动距离越大，且靶标RNA分子浓度与溶液在毛细管中移动距离成线性关系。

2.根据权利要求1所述的RNA定量检测方法，其特征在于，所述S5具体为：将S4中所制备的自驱动DNA水凝胶传感器水平浸入含有已知浓度的靶标RNA分子样品溶液，在毛细作用下，含有靶标RNA分子的溶液通过DNA水凝胶薄膜进入毛细管。